[发明专利]用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的引物、检测方法及试剂盒在审
| 申请号： | 201811043334.1 | 申请日： | 2018-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN109295175A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 陈渊能;何浪平;陈韵姿 | 申请（专利权）人： | 广州健天基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 张小黎 |
| 地址： | 510663 广东省广州市高新技术产业*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供用于检测人胃肠道间质瘤C‑KIT基因V559A突变的引物、检测方法及试剂盒。本发明提供的检测引物能与C‑KIT基因的特异序列结合，扩增突变序列。本发明提供的检测方法采用检测荧光信号基团与扩增片段结合发出荧光信号，利用阻断剂与突变位点对应的野生型序列特异结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用竞争性等位基因特异性PCR扩增技术，建立基于实时荧光PCR的试剂盒，可准确检测C‑KIT基因V559A突变。本发明方法操作简单，结果易读；灵敏度高，能检出含0.001％C‑KIT基因V559A突变的样本，实现对C‑KIT基因V559A突变的超灵敏检测。 | ||
| 搜索关键词： | 突变 检测 试剂盒 人胃肠道 荧光信号 间质 扩增 引物 等位基因特异性 实时荧光PCR 超灵敏检测 野生型序列 非特异性 检测引物 扩增片段 特异结合 特异序列 突变位点 突变序列 准确检测 灵敏度 野生型 阻断剂 检出 样本 | ||
【主权项】：
1.用于检测人胃肠道间质瘤C‑KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将用于检测人胃肠道间质瘤C‑KIT基因V559A突变的引物、阻断剂、检测荧光信号基团、待测基因样品混合，进行实时荧光定量PCR，获得检测结果；其中，引物序列包括突变上游引物和突变下游引物，所述突变上游引物，其长度为15‑40个碱基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的碱基为突变位点，与待测C‑KIT基因V559A突变的一条链互补；所述突变下游引物，长度为15‑40个碱基，与待测C‑KIT基因V559A突变的另一条链互补；所述阻断剂能与C‑KIT基因V559A突变位点野生型序列特异结合，抑制野生型非特异扩增；所述检测荧光信号基团能与PCR扩增片段结合并发出荧光信号。
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