[发明专利]用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的引物、检测方法及试剂盒

权利要求书

1.用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的引物、阻断剂、检测荧光信号基团、待测基因样品混合，进行实时荧光定量PCR，获得检测结果；

其中，引物序列包括突变上游引物和突变下游引物，所述突变上游引物，其长度为15-40个碱基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的碱基为突变位点，与待测C-KIT基因V559A突变的一条链互补；所述突变下游引物，长度为15-40个碱基，与待测C-KIT基因V559A突变的另一条链互补；

所述阻断剂能与C-KIT基因V559A突变位点野生型序列特异结合，抑制野生型非特异扩增；

所述检测荧光信号基团能与PCR扩增片段结合并发出荧光信号。

2.如权利要求1所述的用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，所述突变上游引物，其长度为19个碱基，靠近3’末端的第3位的碱基为突变位点，与待测C-KIT基因V559A突变的一条链互补。

3.如权利要求1所述的用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，所述突变下游引物，其长度为15个碱基，与待测C-KIT基因V559A突变的另一条链互补。

4.如权利要求1所述的用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，所述突变上游引物的序列包括：

GAAGTACAGTGGAAGGCTG(SEQ ID NO.1)，

所述突变下游引物的序列包括：

CTGTTATGTGTACCC(SEQ ID NO.2)。

5.如权利要求1所述的用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，所述阻断剂包括：匹配C-KIT野生型基因的核酸序列，所述核酸序列修饰有化学基团；

其中，所述阻断剂中匹配C-KIT野生型基因的核酸序列包括：

TACAGTGGAAGGTTGTTGAGGA(SEQ ID NO.3)；

所述化学修饰基团包括：胺基、磷酸基团、生物素、生物素-TEG及C3-spacer中的一种或多种。

6.如权利要求1所述的用于检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因V559A突变的检测方法，其特征在于，所述检测荧光信号基团包括：FAM、Cy3、HEX、Texas Red、JOE、VIC、TAMRA、Cy5、SYTO 9、SYBR MIX中的一种或多种。

7.用于检测人类C-KIT基因V559A突变的引物，其特征在于，所述引物包括突变上游引物和突变下游引物，所述突变上游引物，其长度为15-40个碱基，靠近3’末端的第1、2、3、4或5位的碱基为突变位点，与待测C-KIT基因V559A突变型的一条链互补；所述突变下游引物，长度为15-40个碱基，与待测C-KIT基因V559A突变型的另一条链互补。

8.用于检测人类C-KIT基因V559A突变的阻断剂，其特征在于，所述阻断剂能与C-KIT基因V559A突变位点野生型序列特异结合，抑制野生型非特异扩增。

9.用于检测人类C-KIT基因V559A突变的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求7所述的用于检测人类C-KIT基因V559A突变的引物、如权利要求8所述的用于检测人类C-KIT基因V559A突变的阻断剂，还包括检测荧光信号基团。

10.如权利要求1所述的用于检测人类C-KIT基因V559A突变的检测方法、权利要求7所述的用于检测人类C-KIT基因V559A突变的引物和/或权利要求8所述的用于检测人类C-KIT基因V559A突变的试剂盒在检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因突变中的应用，所述应用在突变型基因浓度不低于1％、0.1％、0.01％或0.001％的样品检测人胃肠道间质瘤C-KIT基因突变中的应用。