[发明专利]一种零背景的多片段基因高效率组装方法在审
| 申请号： | 201810956795.1 | 申请日： | 2018-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN110066788A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 239000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种零背景的多片段基因高效率组装方法，包括如下步骤：构建puc57‑CATP载体；构建克隆有CATP基因片段的质粒；选择目标基因，根据基因长度分为小片段进行基因合成，基因两端添加二类酶位点，连接到克隆载体；多个小片段包括已构建的CATP基因片段用Golden gate克隆反应进行组装，使用T7DNA聚合酶作为连接酶，组装产物转化大肠杆菌，涂布于氨苄和氯霉素抗性的LB平板进行筛选。载体质粒在无需预先经过线性化等处理情况下，通过独特的载体和片段设计，一次性同时高效组装多个基因片段；使用保真性更高的T7DNA连接酶，提高了片段正确组装的概率。 | ||
| 搜索关键词： | 组装 构建 基因片段 片段基因 高效率 连接酶 小片段 基因 克隆 大肠杆菌 氯霉素抗性 多个基因 高效组装 基因合成 克隆载体 选择目标 载体质粒 保真性 线性化 一次性 位点 质粒 筛选 概率 转化 | ||
【主权项】：
1.一种零背景的多片段基因高效率组装方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一构建puc57‑CATP载体；步骤二构建克隆有CATP基因片段的质粒；步骤三选择目标基因，根据基因长度分为小片段进行基因合成，基因两端添加二类酶位点，连接到克隆载体；步骤四多个小片段包括已构建的CATP基因片段用Golden gate克隆反应进行组装，使用T7 DNA聚合酶作为连接酶，组装产物转化大肠杆菌，涂布于氨苄和氯霉素抗性的LB平板进行筛选。
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