[发明专利]一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法

摘要

本发明属于多糖类物质分子量检测技术领域，具体涉及的是一种左聚糖(Levan)分子量测定及分离制备的方法。一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法，包括以下步骤：自装GPC渗透凝胶色谱柱分子量检测参数优化选择、分离纯化参数优化选择、酶标法高通量检测糖含量，糖类物质分子量的测定及分离制备过程。本方法能够快速方便地分离纯化不同分子量的左聚糖，尤其适合左聚糖分子量的快速分析测定以及根据不同分子量进行左聚糖的分离制备。本发明具有成本低、操作方便、准确性高的优点，具有很好的生产应用和研究价值。

主权项

1.一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)工作参数及实验操作：1)色谱柱：采用自装渗透凝胶柱；2)柱温：4‑25℃；3)流动相；4)流速；5)进样体积；6)收集范围：使用自动收集器以1‑2min/管进行收集；(2)检测：以苯酚‑硫酸法为基础手动加样，酶标仪OD490nm进行读数的高通量检测糖含量方法，步骤如下：取200μl样品待测液于EP管中→加入100μL6％苯酚溶液后迅速加入500μL浓硫酸溶液→盖上EP管盖子，轻轻震荡摇匀后沸水浴6min→置于冰水浴中变凉，取200μl反应后的溶液于酶标板用酶标仪OD490nm进行测定；(3)葡萄糖标准曲线的制定：葡萄糖标准曲线的制定采用步骤(2)中所述方法；(4)分子量测定操作：以上述步骤(1)中的特征参数为指导进行分子量检测及分离制备：装柱→处理样品→上样→洗脱→收集→加试剂检测→处理数据并分析；(5)分离纯化流程：装柱→处理样品→上样→洗脱→收集→冷冻干燥→称重计算回收率→分子量检测验证，若不是单一对称的峰，则需重复上样分离。