[发明专利]一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法

权利要求书

1.一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)工作参数及实验操作：1)色谱柱：采用自装渗透凝胶柱；2)柱温：4-25℃；3)流动相；4)流速；5)进样体积；6)收集范围：使用自动收集器以1-2min/管进行收集；

(2)检测：以苯酚-硫酸法为基础手动加样，酶标仪OD_490nm进行读数的高通量检测糖含量方法，步骤如下：取200μl样品待测液于EP管中→加入100μL6％苯酚溶液后迅速加入500μL浓硫酸溶液→盖上EP管盖子，轻轻震荡摇匀后沸水浴6min→置于冰水浴中变凉，取200μl反应后的溶液于酶标板用酶标仪OD_490nm进行测定；

(3)葡萄糖标准曲线的制定：葡萄糖标准曲线的制定采用步骤(2)中所述方法；

(4)分子量测定操作：以上述步骤(1)中的特征参数为指导进行分子量检测及分离制备：装柱→处理样品→上样→洗脱→收集→加试剂检测→处理数据并分析；

(5)分离纯化流程：装柱→处理样品→上样→洗脱→收集→冷冻干燥→称重计算回收率→分子量检测验证，若不是单一对称的峰，则需重复上样分离。

2.根据权利要求1所述的左聚糖分子量测定及分离制备的方法，其特征在于，步骤(1)中的自装渗透凝胶柱的填料为高流速6FF琼脂糖微球，所述自装渗透凝胶柱其排阻极限范围为10-4000kDa，所述自装渗透凝胶柱的柱径比范围为1:15-1:20。

3.根据权利要求1所述的左聚糖分子量测定及分离制备的方法，其特征在于，步骤(1)中的流动相为蒸馏水、去离子水、0.1％-2％的Na₂SO₄缓冲液或0.1M的BP缓冲液。

4.根据权利要求1所述的左聚糖分子量测定及分离制备的方法，其特征在于，步骤(1)中的进样体积为柱体积的1-2％；洗脱流速为0.2-1mL/min。