[发明专利]一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法

说明书

本发明属于多糖类物质分子量检测技术领域，具体涉及的是一种左聚糖(Levan)分子量测定及分离制备的方法。一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法，包括以下步骤：自装GPC渗透凝胶色谱柱分子量检测参数优化选择、分离纯化参数优化选择、酶标法高通量检测糖含量，糖类物质分子量的测定及分离制备过程。本方法能够快速方便地分离纯化不同分子量的左聚糖，尤其适合左聚糖分子量的快速分析测定以及根据不同分子量进行左聚糖的分离制备。本发明具有成本低、操作方便、准确性高的优点，具有很好的生产应用和研究价值。

技术领域

本发明属于多糖类物质分子量检测技术领域，具体涉及的是一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法。

背景技术

多糖的分子量测定是研究多糖性质的一项较为重要的工作，不论在多糖性质的研究，或是在它的用途等方面，都涉及到分子量方面的问题，往往需要测定它的分子量，因而测定分子量成为研究和制备多糖一项经常性的工作。

常见用于多糖物质分子量的测定方法有：渗透压法、蒸汽渗透计法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法和超过率法等。

其中(GPC)凝胶色谱法又称为尺寸排阻色谱法，其测定原理是基于体积排阻的分离机理，通过具有分子筛性质的固定相，用来分离不同分子量的物质，并且还可以分析分子体积不同、具有相同化学性质的高分子同系物。此方法中样品分子与固定相凝胶之间无相互固定作用，完全按照分子筛原理分离。

现在实验室用的(HPGPC)高效凝胶渗透色谱法，该实验所用的色谱柱不能自己装填，均为商品柱。常用的商品柱有μ-Bondagel柱系和TSK柱系。为增加分辨率往往需要将两个不同分离范围的色谱柱联用，这就更加使实验室所用仪器费用增加。再加之需要高效液相色谱仪和示差检测器等仪器，整套仪器下来费用较高。

另外一种可以自己装填柱子的方法，相对(HPGPC)高效凝胶渗透色谱法而言实验仪器费用有所减少，但所用填料多为进口，例如：Sephacyl、Sephadex等系列填料，但价格均很昂贵。

此外，在自装柱方法的多糖含量检测中，苯酚硫酸法较为常用。苯酚硫酸比色法测定多糖的原理是先将多糖在浓硫酸作用下水解成单糖再迅速生成糖醛衍生物进而与苯酚发生显色反应。多数反应体系为1ml苯酚溶液和5ml苯酚溶液在试管中进行反应，然后用取适量于比色皿中用分光光度计检测。此方法反应所用试剂有一定的毒性和危险性，在加反应试剂、反应过程中、用完试管后的清洗中试剂对人的毒害作用相对较大。且为达到好的分离效果经常会收集很多管收集，用分光光度计逐一检测实验进程较慢，误差较大。

而对于大多数工厂和小型实验室而言，并没有足够的硬件条件来达到以上两种检测方法的要求。因此，寻找一种经济高效的凝胶柱填料和开发一种安全准确的高通量检测系统具有很重要的意义。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，提供了一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法。

本发明提供的技术方案如下：

一种左聚糖分子量测定及分离制备的方法，包括如下步骤：

(1)工作参数及实验操作：1)色谱柱：采用自装渗透凝胶柱；2)柱温：4-25℃；3)流动相；4)流速；5)进样体积；6)收集范围：使用自动收集器以1-2min/管进行收集；