[发明专利]茶树四重荧光SSR分子标记检测方法

摘要

本发明公开了茶树四重荧光SSR分子标记检测方法，通过引物组合、降落PCR、毛细管荧光电泳等技术的组合，建立了一套茶树四重SSR分子标记检测方法，本方法不仅可以提高茶树SSR分子标记研究效率和准确性，而且可以节约劳力。而目前的茶树SSR分子标记检测主要采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，存在分辨率低、误差大、效率低等不足，本发明提供的四重SSR分子标记检测方法，该方法一次可以完成4对SSR引物的检测。同时，免去了引物退火温度筛选、人工跑胶、人工读带等不足，不仅大大提高了工作效率，而且简便、迅速、准确，方法稳定、重复性好，可进行茶树品种鉴别、指纹图谱构建、群体遗传结构和遗传分化等研究。

主权项

1.茶树四重荧光SSR分子标记检测方法，其特征在于，所述四重荧光SSR分子标记检测是在2个PCR反应体系中实现的，即体系I和体系II，其中各PCR反应体系中包含2组引物，每组引物对应于1个SSR位点，4组引物可实现对4个SSR位点的检测；其中，同一PCR反应体系中的2组引物的目的片段之间不能有重叠区域；对于体系I，包括5个引物，分别为：荧光标记引物①，引物1和引物2的带尾正向引物，引物1和引物2的反向引物；其中引物1和引物2的带尾正向引物分别是指在引物1和引物2正向引物序列的5’端加上与荧光标记引物①相同的序列，但是不加荧光标记物；对于体系II，包括5个引物，分别为：荧光标记引物②，引物3和引物4的带尾正向引物，引物3和引物4的反向引物；其中引物3和引物4的带尾正向引物分别是指在引物3和引物4正向引物序列的5’端加上与荧光标记引物②相同的序列，但是不加荧光标记物；其中，2个荧光标记引物所含有的荧光标记物不同。