[发明专利]一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法

摘要

本发明提供了一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法。其方法为：将辣椒杂交种和亲本培育至芽苗期，提取DNA，应用核心引物对杂交种和亲本进行筛选，只有共显性标记的引物可以作为该杂交种真实性鉴定的分子标记。若辣椒杂交种和亲本在核心引物库中无法筛选出共显性标记，则结合次级核心引物库中继续筛选，直至筛选出共显性标记。本发明建立的快速、同时鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的体系，可实现不受时间和季节的限制，对杂交种的真实性和纯度进行室内快速鉴定。对辣椒雄性不育三系配套杂交种品种保护和杂交种子市场监管提供分子生物学依据。

主权项

1.一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法，其特征在于所述鉴定方法包括以下步骤：（1）将待鉴定的辣椒杂交种和其亲本的种子同时进行培育，直至培育成芽苗；（2）提取芽苗期的辣椒待测材料的DNA；（3）InDel‑PCR扩增：使用核心InDel引物，进行PCR扩增，如果能在PCR结果中扩增出共显性标记，则待鉴定杂交种为真实性杂交种；所述核心InDel引物为：CIDH28、CIDH825、CIDH848、CIDH8、CIDH293、CIDH440、CIDH800、CIDH776、CIDH360、CIDH580、CIDH5、CIDH602、CIDH131、CIDH373、CIDH302、CIDH426、CIDH267、CIDH307、CIDH200、CIDH634、CIDH325、CIDH351、CIDH859、CIDH908、CIDH202；如果无法扩增出共显性标记，则结合次级核心InDel引物继续进行PCR扩增；如果出现共显性标记，则待鉴定杂交种为真实性杂交种；所述次级核心InDel引物为：CIDH569、CIDH110、CIDH864、CIDH261、CIDH438、CIDH423、CIDH27、CIDH170、CIDH763、CIDH762、CIDH694、CIDH70、CIDH112、CIDH565、CIDH951、CIDH640、CIDH209、CIDH937、CIDH769、CIDH131、CIDH602；（4）杂交种纯度鉴定：选择核心InDel引物和次级核心InDel引物中确定的辣椒杂交种真实性鉴定所应用的共显性标记对应的共显性引物，对待纯度鉴定的辣椒杂交种单株编号和取样，取样≧100株；杂交种单株提取DNA后进行电泳检测；若杂交种单株出现共显性标记，则为真实性杂交种，反之为假杂种，辣椒杂交种纯度=具有目的共显性标记的株数/待鉴定的总株数×100%。