[发明专利]一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法

权利要求书

1.一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法，其特征在于所述鉴定方法包括以下步骤：

（1）将待鉴定的辣椒杂交种和其亲本的种子同时进行培育，直至培育成芽苗；

（2）提取芽苗期的辣椒待测材料的DNA；

（3）InDel-PCR扩增：使用核心InDel引物，进行PCR扩增，如果能在PCR结果中扩增出共显性标记，则待鉴定杂交种为真实性杂交种；

所述核心InDel引物为：CIDH28、CIDH825、CIDH848、CIDH8、CIDH293、CIDH440、CIDH800、CIDH776、CIDH360、CIDH580、CIDH5、CIDH602、CIDH131、CIDH373、CIDH302、CIDH426、CIDH267、CIDH307、CIDH200、CIDH634、CIDH325、CIDH351、CIDH859、CIDH908、CIDH202；

如果无法扩增出共显性标记，则结合次级核心InDel引物继续进行PCR扩增；如果出现共显性标记，则待鉴定杂交种为真实性杂交种；

所述次级核心InDel引物为：CIDH569、CIDH110、CIDH864、CIDH261、CIDH438、CIDH423、CIDH27、CIDH170、CIDH763、CIDH762、CIDH694、CIDH70、CIDH112、CIDH565、CIDH951、CIDH640、CIDH209、CIDH937、CIDH769、CIDH131、CIDH602；

（4）杂交种纯度鉴定：选择核心InDel引物和次级核心InDel引物中确定的辣椒杂交种真实性鉴定所应用的共显性标记对应的共显性引物，对待纯度鉴定的辣椒杂交种单株编号和取样，取样≧100株；杂交种单株提取DNA后进行电泳检测；若杂交种单株出现共显性标记，则为真实性杂交种，反之为假杂种，辣椒杂交种纯度=具有目的共显性标记的株数/待鉴定的总株数×100%。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述次级核心InDel引物定位于6号染色体的辣椒育性相关主效基因相关。

3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（1）中是取待鉴定的杂交种及亲本的种子先进行温汤浸种，然后常温浸泡；然后在光照下催芽培养7-10天。

4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（4）中纯度鉴定是在种子发芽后将种子移植至72孔穴盘中，单株标记，基质为发酵菇渣，置于光照培养箱中，白天28℃，夜晚16℃，继续培养5-15天，然后提取DNA检测。

5.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（3）中PCR反应体系为模板DNA2μl，正反引物各1μl，2×Go Taq R Colorless Master Mix7.5μl，用ddH₂O补充至15μl。

6.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述步骤（3）中PCR反应程序为94℃预变性5min；94℃变性30s，退火30s，72℃延伸45s，35个循环；最后72℃总延伸5min。

7.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述辣椒为加工型辣椒。