[发明专利]一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法

说明书

本发明提供了一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法。其方法为：将辣椒杂交种和亲本培育至芽苗期，提取DNA，应用核心引物对杂交种和亲本进行筛选，只有共显性标记的引物可以作为该杂交种真实性鉴定的分子标记。若辣椒杂交种和亲本在核心引物库中无法筛选出共显性标记，则结合次级核心引物库中继续筛选，直至筛选出共显性标记。本发明建立的快速、同时鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的体系，可实现不受时间和季节的限制，对杂交种的真实性和纯度进行室内快速鉴定。对辣椒雄性不育三系配套杂交种品种保护和杂交种子市场监管提供分子生物学依据。

技术领域

本发明属于辣椒育种技术领域，具体涉及一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法。

背景技术

加工型辣椒是辣椒品种中的重要类型，为重要的调味品和色素提取来源，我国播种面积为世界第二，仅次于印度。辣椒雄性不育三系配套杂交种比常规品种有明显的整齐度、高产优质和抗性强等优势，其种植面积和需求在不断增加。加工型辣椒品种更新换代极快，不仅审定品种繁多且不同品种间的相似性很大、差异性很少，肉眼一般不易准确辨别。种子的真假事关农业丰产，与农民的切身利益相关。在生产和销售的过程中，加工型辣椒雄性不育三系配套杂交种质量制辣椒杂交种子的真实性与纯度是加工型辣椒种子质量的一个重要衡量指标。因此一个鉴定准确，鉴定周期短的加工型辣椒杂交种真实性和纯度鉴定方法尤为重要。如何快速高效地进行杂交种的真实性和纯度鉴定，成为了目前需要解决的重要问题。

传统田间形征鉴定种子真实性和纯度的方法，具有周期长、易受环境和人为因素影响等缺陷，鉴定结果严重滞后。分子标记鉴定方法，基于分子生物学的理论基础与分子水平上的鉴别，相比田间形态学鉴定在时间劳动力和准确性上更有优势。目前辣椒中用于真实性和纯度鉴定的分子标记鉴定方法有SRAP标记，SSR 标记和InDel标记。InDel标记作为近年新兴的一种分子生物技术，为锚定标记，无重复序列，稳定性强，准确性高，适用性广。其鉴定成本低，操作简单，结果快速可靠，实用性强序等优点，在基因组中分布均匀。SR标又称微卫星序列标记，其两端序列多为保守的单拷贝序列，多态性丰富，易于检测，但是由于SSR 序列的重复性，使得他在不同品种间的扩增带型不同。而InDel标记的带型比较单一，扩增效率相比SSR标记更高。仪泽会(2012)表明，对于有些位点的SSR 序列无差异的位点，在其侧翼序列中存在InDel序列差异。SRAP标记是对 ORFs(开放阅读框)进行扩增，简单高效、高共显性、重复性、易于分离条带及测序等优点,在基因组中分布均匀的优点，但是由于是对ORFs进行扩增，所以在着丝点附近扩增较少，扩增不均匀。姜童(2017)InDel分子标记CIDH776 可用于三对加工型辣椒雄性不育系与保持系(15005A、15006B，16011A、16012B，16063A、16064B)间的分子标记辅助鉴定。张曼(2012)筛选出用于辣椒品种 JP-6和H-4真实性鉴定的SSR引物CA885。李亚利(2010)用互补型SRAP引物DC1-EM9和ME5-EM20对航椒4号和航椒5号进行纯度纯度鉴定但是由于是对ORFs进行扩增，所以在着丝点附近扩增较少，扩增不均匀。

目前在辣椒上有几种真实性和纯度鉴定的方法，大多都是对单个品种的鉴定。因不同的加工型辣椒品种之间基因型有所差异，每个杂交种的真实性鉴定引物都不同，不同品种之间的真实性和纯度鉴定引物并不通用，每个加工型辣椒品种都必须有自己引物。在辣椒，尤其在加工型辣椒领域没有一套完整的适用性广的快速鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性的方法。且目前在辣椒中的纯度鉴定没有和真实性鉴定结合，即使进行了纯度鉴定，仍无法确定所鉴定种子的真实性。

发明内容

本发明的目的是提供了一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种基于InDel分子标记鉴定辣椒雄性不育三系配套杂交种真实性和纯度的方法，所述鉴定方法包括以下步骤：