[发明专利]一种桃叶珊瑚苷抑制炎症因子释放的应用

摘要

本发明提供了一种桃叶珊瑚苷抑制炎症因子释放的应用，桃叶珊瑚苷能抑制BV2细胞炎症从而控制神经炎症恶化，属于生物化学与分子生物学技术领域。本发明的数据建立在AU对多种细胞系具有非常显著的抗炎、抗氧化作用。本发明的数据以AU的基本化学结构为理论依据，AU是一种环烯醚萜类化合物，这类物质具有良好的抗炎效果，毒副作用小等特点，为研究其抗炎症作用提供了基础。

主权项

1.一种桃叶珊瑚苷抑制炎症因子释放的应用，其特征在于，步骤如下：(1)细胞培养：将BV2细胞放入37℃水浴锅中，融化后，将细胞吸出放入离心管中；在转速1000rpm/min离心5min，倒掉上清；将BV2细胞悬浮于含有体积分数为10％胎牛血清的无菌DMEM培养液中，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养；细胞长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；(2)药物配制：AU用无菌PBS溶解至20mg/mL，保存温度为‑20℃；LPS用无菌DMEM培养基溶解至10mg/mL，保存温度为‑80℃；IFN‑γ用无菌DMEM培养基溶解制105U/mL，保存温度为‑80℃；(3)药物处理正常细胞：传代培养后收集对数生长期的BV2细胞，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基，稀释至5×104‑105/ml，接种于每孔含有100μLBV2细胞对数生长期细胞悬液接种于96孔板中；设置5组实验组及2组对照组，每组6个复孔，第1组：无细胞的空白对照组；第2组：含有BV2细胞的对照组；第3组：5mg/L AU；第4组：10mg/L AU；第5组：50mg/L AU；第6组：150mg/L AU；第7组：200mg/L AU；分别向各组中加入对应的药物，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24小时，分别检测细胞活力记录数据并进行处理；(4)药物处理炎症模型细胞：传代培养后收集对数生长期的BV2细胞，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基，稀释至5×104‑105/ml，接种于每孔含有100μLBV2细胞对数生长期细胞悬液接种于96孔板中；设置7组实验组及2组对照组，每组6个复孔，第1组：无细胞的空白对照组；第2组：含有BV2细胞的对照组；第3组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ组；第4组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+5mg/L AU组；第5组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+10mg/L AU组；第6组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+25mg/L AU组；第7组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+50mg/L AU组；第8组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+100mg/L AU组；第9组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN‑γ+200mg/L AU组，其中LPS、IFN‑γ用于诱导BV2细胞产生炎症反应；分别向各组中加入对应的药物，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24小时，分别检测细胞活力、活性氧、一氧化氮、IL‑1β、IL‑6和TNF‑α水平，记录数据并进行处理。