[发明专利]一种桃叶珊瑚苷抑制炎症因子释放的应用在审
| 申请号： | 201810776571.2 | 申请日： | 2018-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN108992455A | 公开（公告）日： | 2018-12-14 |
| 发明（设计）人： | 薛宏宇;牛蕾;连显会;苗诗雨;王宁;刘勇;姜丽丽;刘亚军 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | A61K31/7048 | 分类号： | A61K31/7048;A61P29/00;A61P25/00;A61P39/06 |
| 代理公司： | 大连理工大学专利中心 21200 | 代理人： | 温福雪;侯明远 |
| 地址： | 124221 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 桃叶珊瑚苷 炎症因子释放 抗炎 环烯醚萜类化合物 分子生物学技术 基本化学结构 抗炎症作用 抗氧化作用 生物化学 毒副作用 神经炎症 数据建立 细胞炎症 应用 恶化 研究 | ||
1.一种桃叶珊瑚苷抑制炎症因子释放的应用，其特征在于，步骤如下：
(1)细胞培养：将BV2细胞放入37℃水浴锅中，融化后，将细胞吸出放入离心管中；在转速1000rpm/min离心5min，倒掉上清；将BV2细胞悬浮于含有体积分数为10％胎牛血清的无菌DMEM培养液中，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中培养；细胞长至培养瓶底面积的70％～80％传代1次；
(2)药物配制：AU用无菌PBS溶解至20mg/mL，保存温度为-20℃；LPS用无菌DMEM培养基溶解至10mg/mL，保存温度为-80℃；IFN-γ用无菌DMEM培养基溶解制105U/mL，保存温度为-80℃；
(3)药物处理正常细胞：传代培养后收集对数生长期的BV2细胞，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基，稀释至5×104-105/ml，接种于每孔含有100μLBV2细胞对数生长期细胞悬液接种于96孔板中；设置5组实验组及2组对照组，每组6个复孔，第1组：无细胞的空白对照组；第2组：含有BV2细胞的对照组；第3组：5mg/L AU；第4组：10mg/L AU；第5组：50mg/L AU；第6组：150mg/L AU；第7组：200mg/L AU；分别向各组中加入对应的药物，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24小时，分别检测细胞活力记录数据并进行处理；
(4)药物处理炎症模型细胞：传代培养后收集对数生长期的BV2细胞，加入含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基，稀释至5×104-105/ml，接种于每孔含有100μLBV2细胞对数生长期细胞悬液接种于96孔板中；设置7组实验组及2组对照组，每组6个复孔，第1组：无细胞的空白对照组；第2组：含有BV2细胞的对照组；第3组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN-γ组；第4组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN-γ+5mg/L AU组；第5组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN-γ+10mg/L AU组；第6组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN-γ+25mg/L AU组；第7组：0.1mg/L LPS+104U/LIFN-γ+50mg/L AU组；第8组：0.1mg/L LPS+104U/L IFN-γ+100mg/L AU组；第9组：0.1mg/LLPS+104U/L IFN-γ+200mg/L AU组，其中LPS、IFN-γ用于诱导BV2细胞产生炎症反应；分别向各组中加入对应的药物，置于浓度为5％CO2、相对湿度为90％、温度为37℃的培养箱中孵育24小时，分别检测细胞活力、活性氧、一氧化氮、IL-1β、IL-6和TNF-α水平，记录数据并进行处理。
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