[发明专利]一种夜来香花叶病毒的TC-RT-nested-PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种夜来香花叶病毒TC‑RT‑nested‑PCR检测试剂盒及其检测方法。本发明的夜来香花叶病毒检测试剂盒包括病毒抽提缓冲液、PBST缓冲液、外侧正向引物、外侧反向引物、内侧正向引物、内侧反向引物、RT Buffer、RNA酶抑制因子、反转录酶、dNTPs、PCR Mix、阳性对照和阴性对照。本发明根据夜来香花叶病毒外壳蛋白基因设计2对特异性引物，采用TC‑RT‑nested PCR技术对夜来香花叶病毒进行检测。本发明的检测方法无需RNA提取步骤，具有操作简便、成本低、特异性强、灵敏度高和准确性好的优点，适用于农业生产及进出境口岸上夜来香花叶病毒的快速检测和监测。

主权项

1.用于检测或辅助检测夜来香花叶病毒的成套引物对，由特异引物对甲和特异引物对乙组成；所述特异引物对甲由外侧正向引物和外侧反向引物组成；所述特异引物对乙由内侧正向引物和内侧反向引物组成；所述外侧正向引物为如下a1)或a2)：a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；所述外侧反向引物为如下a3)或a4)：a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；所述内侧正向引物为如下b1)或b2)：b1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述内侧反向引物为如下b3)或b4)：b3)序列表中序列4所示的单链DNA分子；b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子。