[发明专利]一种夜来香花叶病毒的TC-RT-nested-PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.用于检测或辅助检测夜来香花叶病毒的成套引物对，由特异引物对甲和特异引物对乙组成；

所述特异引物对甲由外侧正向引物和外侧反向引物组成；

所述特异引物对乙由内侧正向引物和内侧反向引物组成；

所述外侧正向引物为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述外侧反向引物为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述内侧正向引物为如下b1)或b2)：

b1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；

所述内侧反向引物为如下b3)或b4)：

b3)序列表中序列4所示的单链DNA分子；

b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子。

2.如权利要求1所述的成套引物对，其特征在于：所述外侧正向引物、所述外侧反向引物、所述内侧正向引物和所述内侧反向引物的摩尔比为1:1:1:1。

3.权利要求1或2所述的成套引物对在如下c1)-c8)中任一所述的应用：

c1)制备用于检测或辅助检测夜来香花叶病毒的产品；

c2)检测或辅助检测夜来香花叶病毒；

c3)制备用于鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为夜来香花叶病毒的产品；

c4)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为夜来香花叶病毒；

c5)制备用于检测或辅助检测待测样品是否感染夜来香花叶病毒的产品；

c6)检测或辅助检测待测样品是否感染夜来香花叶病毒；

c7)制备鉴别或辅助鉴别夜来香花叶病毒与其他病毒的产品；

c8)鉴别或辅助鉴别夜来香花叶病毒与其他病毒。

4.含有权利要求1或2所述成套引物对的试剂盒；

所述试剂盒的功能为如下d1)-d4)中任一种：

d1)检测或辅助检测夜来香花叶病毒；

d2)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为夜来香花叶病毒；

d3)检测或辅助检测待测样品是否感染夜来香花叶病毒；

d4)鉴别或辅助鉴别夜来香花叶病毒与其他病毒。

5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，为如下(Ⅰ)或(Ⅱ)：

(Ⅰ)权利要求1或2所述的成套引物对中各引物对的各条引物分别单独包装；

(Ⅱ)权利要求1或2所述的成套引物对中各引物对的各条引物按比例混合在一起。

6.一种鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为夜来香花叶病毒的方法，包括如下步骤：

e1)以待测病毒的cDNA为模板，采用权利要求1中所述的特异引物对甲进行第1轮PCR扩增，得到第1轮PCR扩增产物；

e2)以所述第1轮PCR扩增产物为模板，采用权利要求1中所述的特异引物对乙进行第2轮PCR扩增，得到第2轮PCR扩增产物；

根据所述第2轮PCR扩增产物判定待测病毒是否为夜来香花叶病毒：

若所述第2轮PCR扩增产物中含有大小为504bp的条带，则所述待测病毒为夜来香花叶病毒；

若所述第2轮PCR扩增产物中不含有大小为504bp的条带，则所述待测病毒不为夜来香花叶病毒。