[发明专利]一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，该方法将已分化出胚根的华重楼种子作为外植体，经过愈伤组织诱导和增殖培养，达到较高的繁殖率后，再经过分化培养和块茎膨大及生根培养，移栽，可以大量繁殖华重楼种苗并缩短华重楼药材生长期。本发明解决了现有技术中存在的华重楼种苗繁殖率低，生长缓慢，不能满足现有市场对华重楼种苗需求的问题。采用本发明方法，2年繁殖率可达60000倍以上，比常规种子繁殖快很多。本发明不仅繁殖率高，还缩短了华重楼药材的田间生长期，并且组培块茎的定植成活率高，适用于华重楼的规模化生产。

主权项

1.一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，包括无菌外植体的获取，其特征在于：经过下列步骤进行培养：1）消毒处理：选择已分化出胚根的华重楼种子，洗净后将胚根切除干净，剩下的部分作为外植体，在超净工作台上将外植体先用酒精浸泡，再用升汞消毒，最后用无菌水冲洗3～4次；2）诱导培养：将消毒处理后的外植体接种在诱导培养基上，在温度20±2 ℃、黑暗条件下培养50‑60 d获得愈伤组织；所述诱导培养基为MS 培养基，诱导培养基中各成分及其浓度如下：6‑ BA    2.0‑3.0 mg·L‑1NAA      0.3‑0.5 mg·L‑12，4‑D    0.1‑0.3 mg·L‑1蔗糖     28000‑30000 mg·L‑1琼脂     7200‑7500 mg·L‑13）增殖培养：在无菌条件下，将步骤2）获得的愈伤组织分切成1‑3 cm3大小后转入增殖培养基中，在温度24±2℃，黑暗条件下培养30‑50 d，愈伤组织大量增殖；所述增殖培养基为MS 培养基，增殖培养基中各成分及其浓度如下：6‑ BA    1.0‑2.0 mg·L‑1NAA      0.2 mg·L‑12，4‑D    0.1 mg·L‑1蔗糖     28000‑30000 mg·L‑1琼脂     7200‑7500 mg·L‑14）分化培养：将步骤3）获得的愈伤组织分切成1‑3 cm3大小后转入分化培养基中，在温度24±2℃，黑暗条件下培养50‑70 d，愈伤组织即可分化出小块茎；所述分化培养基为MS 培养基，分化培养基中各成分及其浓度如下：6‑ BA   1.0 mg·L‑1NAA     0.2 mg·L‑1蔗糖    28000‑30000 mg·L‑1琼脂    7200‑7500 mg·L‑15）膨大和生根培养：将步骤4）获得的小块茎分切成单个后转入膨大和生根培养基中，在温度24±2 ℃，黑暗条件下培养70‑90 d，小块茎迅速膨大及生根；所述膨大和生根培养基为MS 培养基，膨大和生根培养基中各成分及其浓度如下：6‑ BA    1.0 mg·L‑1NAA      0.1 mg·L‑1IAA      0.1 mg·L‑1蔗糖     58000‑60000 mg·L‑1琼脂     7200‑7500 mg·L‑16）移栽：当步骤5）培养的块茎的根长为0.5‑2.0 cm时，取出块茎，洗去根部的培养基后移栽到基质中生长。