[发明专利]一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，该方法将已分化出胚根的华重楼种子作为外植体，经过愈伤组织诱导和增殖培养，达到较高的繁殖率后，再经过分化培养和块茎膨大及生根培养，移栽，可以大量繁殖华重楼种苗并缩短华重楼药材生长期。本发明解决了现有技术中存在的华重楼种苗繁殖率低，生长缓慢，不能满足现有市场对华重楼种苗需求的问题。采用本发明方法，2年繁殖率可达60000倍以上，比常规种子繁殖快很多。本发明不仅繁殖率高，还缩短了华重楼药材的田间生长期，并且组培块茎的定植成活率高，适用于华重楼的规模化生产。

技术领域

本发明属于植物繁育技术领域，具体涉及一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法。

背景技术

华重楼又名七叶一枝花，是珍贵中药材。华重楼种子因具有自然繁殖率低，种胚发育不完全，胚乳坚硬和胚轴后熟等具有明显“双重休眠”的特性，因此其种子播种后通常需要经历两个冬天才能萌发，其成苗生长时间长。而常规根茎切段育苗，由于土壤温度和湿度无法控制，切口愈合不理想，易感染病菌类而导致整块根茎溃烂，种质材料损失高；此外潜伏芽萌发时间长，萌发率低，多芽同时萌发较少，从而导致总的繁殖系数降低，繁殖生产出的种苗质量差。

利用组织培养的方法进行快速繁殖，具有繁殖系数大、去病毒、迅速更新品种等优点，在百合上已有许多成功的报道。而华重楼的组培尚未见系统研究及应用。

目前华重楼的组织培养主要集中在种子的无菌萌发、愈伤组织诱导和培养方面，关于华重楼组培苗增殖及生根方面的研究，以及试管根茎增殖及膨大方面的研究较少。

中国专利CN201310529238.9公开了一种华重楼植株的快速繁殖方法，该专利采用的是华重楼的根茎作外植体，存在以下缺点：由于根茎长在土壤中，导致初代培养污染十分严重，此外由于根茎本身是药材，且一般只有前部一、两个芽体能诱导出愈伤组织，因此该方法会浪费大量的原材料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种繁殖速度快、数量多的高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，以满足市场需求。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，包括无菌外植体的获取，经过下列步骤进行培养：

1）消毒处理：选择已分化出胚根的华重楼种子，先用流水冲洗干净，再用洗衣粉浸泡，用刷子轻刷，然后用自来水冲洗干净，然后将胚根切除干净，剩下的部分作为外植体，在超净工作台上将外植体先用酒精浸泡，再用升汞消毒，最后用无菌水冲洗3～4次；

2）诱导培养：将消毒处理后的外植体接种在诱导培养基上，在温度20±2 ℃、黑暗条件下培养50-60 d获得愈伤组织；

所述诱导培养基为MS 培养基，诱导培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 2.0-3.0 mg·L^-1

NAA 0.3-0.5 mg·L^-1

2，4-D 0.1-0.3 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

琼脂 7200-7500 mg·L^-1

3）增殖培养：在无菌条件下，将步骤2）获得的愈伤组织分切成1-3 cm³大小后转入增殖培养基中，在温度24±2℃，黑暗条件下培养30-50 d，愈伤组织大量增殖；

所述增殖培养基为MS 培养基，增殖培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 1.0-2.0 mg·L^-1