[发明专利]一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法

权利要求书

1.一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，包括无菌外植体的获取，其特征在于：经过下列步骤进行培养：

1）消毒处理：选择已分化出胚根的华重楼种子，洗净后将胚根切除干净，剩下的部分作为外植体，在超净工作台上将外植体先用酒精浸泡，再用升汞消毒，最后用无菌水冲洗3～4次；

2）诱导培养：将消毒处理后的外植体接种在诱导培养基上，在温度20±2 ℃、黑暗条件下培养50-60 d获得愈伤组织；

所述诱导培养基为MS 培养基，诱导培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 2.0-3.0 mg·L^-1

NAA 0.3-0.5 mg·L^-1

2，4-D 0.1-0.3 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

琼脂 7200-7500 mg·L^-1

3）增殖培养：在无菌条件下，将步骤2）获得的愈伤组织分切成1-3 cm³大小后转入增殖培养基中，在温度24±2℃，黑暗条件下培养30-50 d，愈伤组织大量增殖；

所述增殖培养基为MS 培养基，增殖培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 1.0-2.0 mg·L^-1

NAA 0.2 mg·L^-1

2，4-D 0.1 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

琼脂 7200-7500 mg·L^-1

4）分化培养：将步骤3）获得的愈伤组织分切成1-3 cm³大小后转入分化培养基中，在温度24±2℃，黑暗条件下培养50-70 d，愈伤组织即可分化出小块茎；

所述分化培养基为MS 培养基，分化培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 1.0 mg·L^-1

NAA 0.2 mg·L^-1

蔗糖 28000-30000 mg·L^-1

琼脂 7200-7500 mg·L^-1

5）膨大和生根培养：将步骤4）获得的小块茎分切成单个后转入膨大和生根培养基中，在温度24±2 ℃，黑暗条件下培养70-90 d，小块茎迅速膨大及生根；

所述膨大和生根培养基为MS 培养基，膨大和生根培养基中各成分及其浓度如下：

6- BA 1.0 mg·L^-1

NAA 0.1 mg·L^-1

IAA 0.1 mg·L^-1

蔗糖 58000-60000 mg·L^-1

琼脂 7200-7500 mg·L^-1

6）移栽：当步骤5）培养的块茎的根长为0.5-2.0 cm时，取出块茎，洗去根部的培养基后移栽到基质中生长。

2.根据权利要求1所述的一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，其特征在于：步骤1）中，所述浸泡用的酒精浓度为70-75%，浸泡时间为25-35 s。

3.根据权利要求1所述的一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，其特征在于：步骤1）中，所述消毒用的升汞浓度为0.1-0.15%，消毒时间为8-10 min。

4.根据权利要求1所述的一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，其特征在于：步骤2）-步骤5）中，培养基的pH均为5.6-6.0。

5.根据权利要求4所述的一种高效诱导华重楼种苗繁殖的方法，其特征在于：步骤2）-步骤5）中，培养基的pH均为5.8。