[发明专利]胰腺癌基底微绒毛的检测方法和应用

摘要

本发明属于临床医学和诊断领域，具体涉及利用微血管内皮细胞基底微绒毛物理参数预测肿瘤内部的代谢水平，其利用免疫荧光染色和激光共聚焦的扫描重建方法，重建肿瘤微循环内皮细胞的微绒毛完整结构，测量微绒毛的物理参数密度和长度，与病人的PET‑CT SUVmax值对比分析，预测肿瘤组织内的代谢水平。结果显示，微血管基底微绒毛长度和密度的均值和中位数均与肿瘤组织的糖摄取能力直接相关；微血管基底微绒毛密度和长度的均值和中位数的联合参数与肿瘤组织糖摄取能力相关性更强。微血管皮细胞基底微绒毛只存在于恶性肿瘤内，而且该指标是病理学技术指标，属于肿瘤诊断黄金标准范畴，因此这个指标的特异性远高于代谢相关其它影像学指标。

主权项

1.一种测量胰腺癌基底微绒毛物理参数的方法，其特征在于，具体步骤包括：病理切片3D免疫荧光染色，微血管基底微绒毛长度和密度的检测、计数；其中：（一）病理切片3D免疫荧光染色，具体流程为：病理切片：对肿瘤组织用4%多聚甲醛固定24‑48小时，再用10%‑30%蔗糖依次脱水至组织下沉；然后利用冰冻切片机制作40‑50微米切片，放入含有PBS溶液的6孔板中保存；免疫荧光染色，具体步骤为：（1）将组织切片挑入孔板中用PBS清洗3‑6次，每次10‑30分钟；再挑入封闭液中室温封闭50‑90分钟；封闭液成分为：10% 驴血清 、0.01%‑0.2% Triton X‑100和PBS；（2）挑入含I抗的孵育液中，在4℃摇床上孵育过夜；孵育液成分为5%驴血清、0.01%‑0.2% triton X‑100和PBS；（3）将组织切片在PBS溶液中洗3‑6次，每次10‑30分钟；然后挑入含相应的荧光II抗和DAPI孵育液中，摇床上室温孵育1.5‑2.5个小时或4℃过夜；（4）II抗缓冲液孵育完成后再用PBS清洗3‑6次，每次10‑30分钟；（5）清洗完以后，将组织切片移到载玻片上展片，用水溶性封片剂封片；（6）室温闭光过夜，然后进行扫描、记数；（二）微血管基底微绒毛长度和密度的检测、计数；（1）采用3D扫描；（2）通过Image J软件把Z‑轴扫描图片Z‑stacked， 然后测量微血管的表面面积，计算微绒毛数量并测量微绒毛长度。