[发明专利]基于解旋酶检测DNA与蛋白质相互作用的方法在审
| 申请号： | 201810437177.6 | 申请日： | 2018-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN110470844A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 滕翠娟;徐春华;李明 | 申请（专利权）人： | 中国科学院物理研究所 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/53 |
| 代理公司： | 11280 北京泛华伟业知识产权代理有限公司 | 代理人： | 李渤;郭广迅<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 100190 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种用于检测DNA与蛋白质相互作用的方法，所述方法基于解旋酶，通过DNA分子长度的变化，确定蛋白质在发卡DNA上的结合位点。与现有技术相比，本发明的方法为单分子操作，直观反映蛋白质分子和DNA分子的相互作用；本方法的精确率很高，达到一个碱基对；本发明的方法还可以检测DNA与蛋白质的各个结合位点的结合强度的强弱；所述方法所需要的DNA和蛋白质的用量很少。 | ||
| 搜索关键词： | 蛋白质 结合位点 蛋白质相互作用 蛋白质分子 发卡DNA 单分子 解旋酶 检测 碱基 直观 强弱 | ||
【主权项】：
1.一种基于解旋酶检测DNA与蛋白质相互作用的方法，所述方法包括以下步骤：/n1)根据所检测的蛋白质设计DNA分子；/n其中，所述DNA分子包含发卡结构和两个双链DNA手柄，所述发卡上含有解旋酶结合位点，两个双链DNA手柄的末端分别修饰地高辛和生物素，并且所述解旋酶的解旋方向是解旋发卡DNA的方向；/n2)将步骤1)得到的DNA分子与链霉亲和素修饰的顺磁性小球溶液混匀，使DNA分子修饰生物素的手柄与顺磁性小球连接，获得DNA分子与顺磁性小球的组合体；/n其中，1μL 50pmol的DNA分子使用1～50μL浓度为10mg/ml的磁性小球混匀；/n3)将步骤2)获得的DNA分子与顺磁性小球的组合体放入磁镊装置的样品池中，所述样品池的表面耦合抗地高辛，使得所述组合体连接到样品池的表面；利用微流泵向样品池中加入解旋酶，并对DNA分子施加6～8pN的拉力，得到第一信号；/n4)将步骤2)获得的DNA分子与顺磁性小球的组合体放入磁镊装置的另一样品池中，所述样品池的表面耦合抗地高辛，使得所述组合体连接到样品池的表面；利用微流泵向样品池中加入待检测的蛋白质，然后加入解旋酶，对DNA分子施加6～8pN的拉力，得到第二信号；/n5)比较第一信号和第二信号，得到蛋白质在发卡DNA上的结合位置。/n
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