[发明专利]一种磷光探针选择性检测凝血酶的方法

摘要

本发明公开了一种磷光探针选择性检测凝血酶的方法。它是利用凝血酶适配体（TBA）与凝血酶之间具有较强的特异性结合，从而使MPA包覆的Mn掺杂ZnS磷光量子点与凝血酶适配体，混合猝灭体系中的TBA离开量子点表面，导致体系磷光强度恢复。相对于荧光量子点，磷光量子点因其磷光寿命长、可避免自体荧光和散色光的干扰、选择性强、检测时无需加入任何除氧剂和诱导剂等优点，在检测中运用更加广泛。在本发明中磷光量子点和TBA均未修饰，很大程度的简化了合成步骤，同时也降低了实验成本。该方法准确度高，灵敏度高，在实际样品的检测中都有很好的应用前景。

主权项

1.一种免标记且结合凝血酶适配体的“off‑on”型磷光探针定量检测凝血酶的方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）向离心管中依次加入5‑50 μLMPA包覆的Mn掺杂ZnS量子点母液，50 μL (0.1M) pH=6.0‑9.0 Tris‑HCl缓冲溶液混合均匀后，再向其中加入50 μL梯度浓度（1 μM‑11 μM）TBA溶液作为磷光猝灭剂，加高纯水定容至500 μL，摇匀静置1‑40 min后，将荧光分光光度计调成磷光检测模式，设置激发波长为315 nm进行检测；（2）向离心管中依次加入5‑50 μLMPA包覆的Mn掺杂ZnS量子点母液，50 μL (0.1M) pH=6.0‑9.0 Tris‑HCl缓冲溶液混合均匀后，再向其中加入50 μL梯度浓度（1μM‑11 μM）TBA溶液作为磷光猝灭剂，加高纯水定容至450 μL，摇匀静置1‑40 min，待其磷光猝灭达到平衡状态后，加入50 μL梯度浓度（0.223‑22.3μM）凝血酶溶液作为磷光恢复剂，摇匀静置1‑45 min后，将荧光分光光度计调成磷光检测模式，设置激发波长为315 nm进行检测；（3）以步骤（1）对磷光量子点探针的磷光进行猝灭，以步骤（2）对量子点的磷光进行恢复，并以其对步骤（1）的磷光恢复响应值为检测信号，检测样品中凝血酶的浓度；凝血酶样品须溶解于自制生理盐水中，自制生理盐水配方为：称取0.8克氯化钠，溶解在少量高纯水中，稀释到100毫升；高纯水须用0.45 μm水系膜过滤。