[发明专利]构建目的序列DNA文库的试剂盒及目的序列DNA文库的构建方法有效
| 申请号： | 201810369205.5 | 申请日： | 2018-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN108588064B | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 张素芬;严令华 | 申请（专利权）人： | 上海桐树生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 刘晓玲 |
| 地址： | 200135 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种构建目的序列DNA文库的试剂盒及目的序列DNA文库的构建方法。该试剂盒包括：目的序列扩增试剂，用于从待测样本中扩增目的序列得到第一样本；消化试剂，用于去除第一样本中的引物得到第二样本，消化试剂包括0.2U/uL～2U/uL的UDG酶、0.2U/uL～5U/uL的Fpg酶、0.2U/uL～4U/uL的聚合酶及0.2U/uL～2U/uL的T4多聚核苷酸激酶；及连接试剂，用于对第二样本接上接头得到目的序列DNA文库。上述试剂盒的构建的文库质量较好、测序覆盖度较高且均一性较好。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 试剂盒 样本 多聚核苷酸 消化 待测样本 连接试剂 序列扩增 激酶 覆盖度 聚合酶 均一性 上接头 测序 扩增 去除 引物 文库 | ||
【主权项】：
1.一种构建目的序列DNA文库的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：目的序列扩增试剂，用于从待测样本中扩增目的序列得到第一样本，所述目的序列扩增试剂包括目的序列扩增反应液，所述目的序列扩增反应液包括1U/mL～5U/mL的DNA聚合酶、300mM～500mM的KCl、10mM～15mM的MgCl2及8mM～12mM的dNTPs，所述待测样本为FFPE样本；消化试剂，用于去除所述第一样本中的引物得到第二样本，所述消化试剂由如下组分构成：0.2U/uL～2U/uL的UDG酶、0.2U/uL～5U/uL的Fpg酶、0.2U/uL～4U/uL的聚合酶及0.2U/uL～2U/uL的T4多聚核苷酸激酶，所述聚合酶选自T4 DNA聚合酶与Klenow片段中至少一种；及连接试剂，用于对所述第二样本接上接头得到目的序列DNA文库，所述连接试剂包括连接反应液，所述连接反应液包括100U/μL～500U/μL的T4 DNA连接酶、体积百分含量为5％～15％的PEG6000、体积百分含量为10％～15％的甘油、体积百分含量为2％～10％的1,2‑丙二醇、8mM～12mM的KCl、0.5mM～2mM的ATP及1nM～3nM的dNTPs。
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