[发明专利]一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法在审
| 申请号： | 201810332394.9 | 申请日： | 2018-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN108410857A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 邓紫宇;唐庆兰;陈健波;刘媛;卢翠香;郭东强;李昌荣;任世奇;项东云;周维;伍琪;梁忠云 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区林业科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南宁深之意专利代理事务所(特殊普通合伙) 45123 | 代理人： | 卢颖 |
| 地址： | 530002 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其包括以下步骤：（1）用液氮研磨样品至粉末状后移至离心管，加入常规预热的DNA提取缓冲液，混匀后于65℃水浴30min；（2）取出离心管冷却至室温，加入氯仿与异戊醇混合液，混匀后离心分离；（3）取上清液，加入氯仿，混匀后离心分离；（4）取上清液，加入常规预冷的无水乙醇，混匀后在‑20℃下静置30min后离心分离，弃上清液；（5）用体积浓度75%乙醇清洗沉淀，室温下干燥并加入DNA溶解缓冲液，置于‑20℃保存备用。本方法能有效、快速地提取出纯度高、适用于PCR检测的互叶白千层基因组DNA，并且在提取过程中减少有毒药品的使用。 | ||
| 搜索关键词： | 混匀 基因组DNA 白千层 取上清液 离心管 氯仿 无水乙醇 液氮研磨 乙醇清洗 缓冲液 混合液 上清液 异戊醇 预热的 后移 水浴 预冷 备用 沉淀 冷却 取出 保存 | ||
【主权项】：
1.一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1) 用液氮研磨互叶白千层新鲜叶样至粉末状，迅速移至离心管，加入常规预热的DNA提取缓冲液，混匀后于65℃水浴30min；（2) 取出离心管冷却至室温，加入与DNA提取缓冲液等体积的氯仿与异戊醇混合液，其混合液体积比为：氯仿:异戊醇=24:1，混匀后于12000 r/min离心10min；（3）取上清液置于新的离心管，加入与上清液等体积的氯仿，混匀后于12000 r/min离心10min；（4）取上清液置于新的离心管，加入上清液1.5倍体积的常规预冷的无水乙醇，混匀后于‑20℃静置30min，12000 r/min离心10min，弃上清液；（5）用体积浓度75%乙醇清洗沉淀2次，室温下干燥5min，加入DNA溶解缓冲液，置于‑20℃保存备用。
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