[发明专利]一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法

说明书

本发明提供了一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其包括以下步骤：（1）用液氮研磨样品至粉末状后移至离心管，加入常规预热的DNA提取缓冲液，混匀后于65℃水浴30min；（2）取出离心管冷却至室温，加入氯仿与异戊醇混合液，混匀后离心分离；（3）取上清液，加入氯仿，混匀后离心分离；（4）取上清液，加入常规预冷的无水乙醇，混匀后在‑20℃下静置30min后离心分离，弃上清液；（5）用体积浓度75%乙醇清洗沉淀，室温下干燥并加入DNA溶解缓冲液，置于‑20℃保存备用。本方法能有效、快速地提取出纯度高、适用于PCR检测的互叶白千层基因组DNA，并且在提取过程中减少有毒药品的使用。

技术领域

本发明属于植物DNA提取技术领域，具体涉及互叶白千层的基因组DNA提取方法。

背景技术

互叶白千层（Melaleucaalternifolia）是桃金娘科（Myrlaceaca）白千层属（Melaleuca）常绿灌木至小乔木树种，自然分布于澳大利亚东北部的昆士兰州和新南威尔士州北部。互叶白千层新鲜枝叶可提取精油，杀菌效果佳，广泛应用于食品、制药、香料等行业。

互叶白千层精油根据组分不同分为三种不同生化类型。根据不同的利用目的，选择引种不同生化类型的互叶白千层可避免不必要的经济损失。但是不同生化类型互叶白千层表型特征区分困难，化学分析工艺复杂，所以目前普遍采用具有快速、准确特点的分子生物技术来鉴定植物的品种。其中PCR技术是分子生物学基本技术，是开展植物品种鉴定的基础，而高质量DNA的提取是进行PCR检测的前提，所以采用合适的方法提取互叶白千层基因组DNA对于它的品种鉴定尤为重要。

在研究植物DNA提取方法时需要注意的是一种植物DNA提取方法往往不能很好的应用于不同种类的植物DNA的提取。其原因是植物除了含有蛋白质、糖类、脂肪等主要物质外，还有一些存在于植物体内，虽然与植物的生长发育无直接关系、但却对植物适应不良环境或抵御病原物侵害以及植物的代谢调控等都有重要作用的有机物。这一类物质被称为次生物质，其种类繁杂，而且在植物体内合成和分解产生的次生代谢产物也是极其复杂，这使得不同植物之间的基因组DNA有较大的区别。因此DNA的提取方法也会有所区别。

目前，提取互叶白千层基因组DNA的方法还未见有报道，采用常规的SDS法和CTAB法提取互叶白千层基因组DNA时，所获得的DNA质量差、用于PCR扩增的效果差，而采用试剂盒提取互叶白千层基因组DNA，成本高、DNA得率低。

发明内容

本发明针对现有技术不足，提供了一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，该方法可以提取适合分子鉴定的高质量高浓度的互叶白千层基因组DNA，并且还具有毒性小、易操作、成本低的优点。

为了实现上述发明目的，本发明的技术方案如下：

一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，包括以下步骤：

（1) 用液氮研磨互叶白千层新鲜叶样至粉末状，迅速移至离心管，加入常规预热的DNA提取缓冲液，混匀后于65℃水浴30min；

（2) 取出离心管冷却至室温，加入与DNA提取缓冲液等体积的氯仿与异戊醇混合液，其混合液体积比为：氯仿:异戊醇=24:1，混匀后于12000r/min离心10min；

（3）取上清液置于新的离心管，加入与上清液等体积的氯仿，混匀后于12000 r/min离心10min；

（4）取上清液置于新的离心管，加入上清液1.5倍体积的常规预冷的无水乙醇，混匀后于-20℃静置30min，12000 r/min离心10min，弃上清液；

（5）用体积浓度75%乙醇清洗沉淀2次，室温下干燥5min，加入DNA溶解缓冲液，置于-20℃保存备用。