[发明专利]一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法在审
| 申请号： | 201810332394.9 | 申请日： | 2018-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN108410857A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 邓紫宇;唐庆兰;陈健波;刘媛;卢翠香;郭东强;李昌荣;任世奇;项东云;周维;伍琪;梁忠云 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区林业科学研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 南宁深之意专利代理事务所(特殊普通合伙) 45123 | 代理人： | 卢颖 |
| 地址： | 530002 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 混匀 基因组DNA 白千层 取上清液 离心管 氯仿 无水乙醇 液氮研磨 乙醇清洗 缓冲液 混合液 上清液 异戊醇 预热的 后移 水浴 预冷 备用 沉淀 冷却 取出 保存 | ||
1.一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1) 用液氮研磨互叶白千层新鲜叶样至粉末状，迅速移至离心管，加入常规预热的DNA提取缓冲液，混匀后于65℃水浴30min；
（2) 取出离心管冷却至室温，加入与DNA提取缓冲液等体积的氯仿与异戊醇混合液，其混合液体积比为：氯仿:异戊醇=24:1，混匀后于12000 r/min离心10min；
（3）取上清液置于新的离心管，加入与上清液等体积的氯仿，混匀后于12000 r/min离心10min；
（4）取上清液置于新的离心管，加入上清液1.5倍体积的常规预冷的无水乙醇，混匀后于-20℃静置30min，12000 r/min离心10min，弃上清液；
（5）用体积浓度75%乙醇清洗沉淀2次，室温下干燥5min，加入DNA溶解缓冲液，置于-20℃保存备用。
2.根据权利要求1所述的一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：步骤（1)所述的DNA提取缓冲液的配方为：2% CTAB、PH为8.0的100mM Tris-HCl、PH为8.0的20mM EDTA、1M NaCl。
3.根据权利要求1所述的一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：步骤（1）所述的新鲜叶样的重量为1-2g，所述的DNA提取缓冲液加入量为600μl-800μl。
4.根据权利要求1所述的一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：步骤（5）所述的DNA溶解缓冲液的配方为：PH为8.0的10mM Tris-HCl、PH为8.0的1mM EDTA、20-30μg/ml RNA酶。
5.根据权利要求3所述的一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：步骤（1）所述的新鲜叶样的重量为1g，所述的DNA提取缓冲液加入量为600μl。
6.根据权利要求4所述的一种有效提取互叶白千层基因组DNA的方法，其特征在于：步骤（5）所述的DNA溶解缓冲液的配方为：PH为8.0的10mM Tris-HCl、PH为8.0的1mM EDTA、20μg/ml RNA酶。
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