[发明专利]一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法有效
| 申请号： | 201810324356.9 | 申请日： | 2018-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN108277200B | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 罗茜;陈伟 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物科学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 510640 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，包括以下步骤：选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出卵泡；剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，刮除卵黄和颗粒细胞层；在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，进行消化处理；再次刮除上述的组织内外两面细胞，吹打、冲洗组织层；将冲洗干净的组织层置于新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液中，进行消化处理；将组织剪成碎片，进行消化处理；将混悬液用细胞网筛过滤，收集滤液，加入胎牛血清终止消化，离心收集细胞沉淀，制备得到蛋鸭小卵泡膜细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蛋鸭 卵泡 细胞 分离 提取 方法 | ||
【主权项】：
1.一种蛋鸭小卵泡膜细胞的分离提取方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选取一只产蛋期蛋鸭，解剖剪取卵巢组织，分离出3‑6mm小卵泡，将小卵泡置于盛有灭菌PBS的培养皿中；步骤2、用眼科镊剥离小卵泡外的结缔组织层，固定住卵泡后用眼科剪将小卵泡剪破，将卵泡膜翻转，卵泡膜内层朝上，用眼科镊刮除卵黄和颗粒细胞层；步骤3、在卵泡膜层中加入Ⅱ型胶原蛋白酶消化液，置于干净的培养皿中，并放置在培养箱中进行消化处理；步骤4、用镊子再次刮除步骤3中的组织内外两面细胞，吹打、冲洗组织层；步骤5、将步骤4中冲洗干净的组织层置于新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液中，进行消化处理；步骤6、将步骤5制备得到的组织剪成碎片，加入新配置的Ⅱ型胶原蛋白酶消化液进行消化处理；步骤7、将混悬液用细胞网筛过滤，收集滤液，加入胎牛血清终止消化，离心收集细胞沉淀，制备得到蛋鸭小卵泡膜细胞。
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