[发明专利]一种检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片制备方法和检测方法在审
| 申请号： | 201810301162.7 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108318684A | 公开（公告）日： | 2018-07-24 |
| 发明（设计）人： | 周斌;侯金秀;阚琳 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 徐冬涛 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片的制备方法，优化PPV VP2密码子，克隆至pColdI后，转化至大肠杆菌Rossetta 2，进行PPV VP2蛋白的表达。成功表达的VP2蛋白用镍磁珠纯化。将纯化后的PPV VP2蛋白点样到环氧基片，于37℃干燥过夜。次日将芯片表面贴上芯片围栏，每个围栏封闭、洗涤即得。检测时，将封闭后的芯片加入PPV抗体阳性猪血清，洗涤、干燥，加入兔抗猪金标二抗孵育、洗涤、干燥，每个围栏加入银染显色液显色，洗涤后干燥观察结果。本发明提供的检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片可用于实验室检测，也可满足基层养殖场，能够更快速、方便、高通量地检测猪细小病毒抗体的蛋白芯片诊断技术，及时监测猪群细小病毒抗体水平。 | ||
| 搜索关键词： | 猪细小病毒 蛋白芯片 抗体 洗涤 可视化 检测 种检测 制备 细小病毒抗体 大肠杆菌 实验室检测 磁珠纯化 抗体阳性 围栏封闭 芯片表面 芯片围栏 银染显色 诊断技术 密码子 兔抗猪 液显色 猪血清 点样 二抗 孵育 高通 环氧 金标 可用 贴上 猪群 养殖场 围栏 克隆 芯片 封闭 监测 转化 优化 基层 成功 | ||
【主权项】：
1.一种检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：S1：优化PPV VP2密码子，合成优化的猪细小病毒PPV VP2基因(SEQ ID No.1)；S2：将S1制得的猪细小病毒PPV VP2基因克隆至载体pColdI，得到酶切和测序鉴定正确的阳性克隆pColdI‑VP2；S3：将S2制得的阳性克隆pColdI‑VP2转化至大肠杆菌Rossetta 2，培养转化体，经IPTG诱导，对培养物包涵体洗涤、溶解，用His标签蛋白磁珠纯化后，透析复性、纯化得到重组蛋白PPV VP2，‑80℃保存备用；S4：将S3制得的重组蛋白PPV VP2稀释，点样在芯片载体上，所述芯片载体为环氧基片，干燥，封闭，洗涤，制得检测猪细小病毒抗体的可视化蛋白芯片。
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