[发明专利]慢性青光眼动物模型建立方法及其应用在审
| 申请号： | 201810253148.4 | 申请日： | 2018-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN108210520A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 吴仁毅;黄昌泉;汪耀;吕洁璇;李晓红 | 申请（专利权）人： | 厦门大学附属厦门眼科中心有限公司 |
| 主分类号： | A61K35/30 | 分类号： | A61K35/30;C12N5/079;A61K49/00;A01K67/02 |
| 代理公司： | 厦门市新华专利商标代理有限公司 35203 | 代理人： | 彭志成 |
| 地址： | 361004 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明公开的慢性青光眼动物模型建立方法，包括步骤：（1）取GFP‑SD大鼠的结膜组织，灭菌，消化，分离结膜上皮层，得到结膜基质组织块；（2）结膜基质组织块胰酶中消化，用细胞培养液终止消化，吹打成单细胞悬浊液，经细胞筛，离心处理，弃掉上清液，得到结膜基质细胞沉淀；（3）加入适量的细胞培养液，吹打成单细胞后进行计数，体外培养，得到数量可观的结膜基质细胞；（4）结膜基质细胞用胰酶消化后，用步骤（2）的方法处理得到结膜基质细胞沉淀，加入适量的细胞培养液得到细胞悬浊液；（5）将10 ul 细胞悬浊液用微量注射器注入大鼠右眼前房内并充分混匀。该方法得到的青光眼动物模型具有长期稳定、简便易行、重复性好、成本低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 结膜 基质细胞 细胞培养液 细胞悬浊液 动物模型建立 慢性青光眼 基质组织 吹打 消化 沉淀 微量注射器 青光眼 长期稳定 动物模型 结膜组织 离心处理 体外培养 胰酶消化 上皮层 上清液 细胞筛 灭菌 大鼠 混匀 胰酶 右眼 细胞 应用 | ||
【主权项】：
1.慢性青光眼动物模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）取GFP‑SD大鼠的结膜组织，灭菌；将结膜组织放入分散酶或IV型胶原酶消化液中，并置于细胞培养箱消化，分离弃掉结膜上皮层，得到结膜基质组织块；（2）将前述结膜基质组织块放入胰酶中消化，用细胞培养液终止消化，并吹打成单细胞悬浊液；单细胞悬浊液经70um孔径大小的细胞筛，后于离心机中离心处理，弃掉上清液，得到结膜基质细胞沉淀；（3）在前述结膜基质细胞沉淀中加入适量的细胞培养液，吹打成单细胞后进行计数，将单细胞以一定密度种植于培养皿中进行体外培养，得到数量可观的结膜基质细胞；（4）经体外培养得到的结膜基质细胞用胰酶消化后，用步骤（2）的方法处理得到结膜基质细胞沉淀，加入适量的细胞培养液得到细胞悬浊液，细胞计数，使得最终细胞密度为1 × 107 个/ml；（5）在麻醉下将10 ul 步骤（4）得到的细胞悬浊液用微量注射器注入大鼠右眼前房内并充分混匀，使其均匀分布于前房，左眼不处理作为正常对照眼球。
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