[发明专利]餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法

摘要

本发明提供了餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法，步骤为：1)菌株的培养鉴定与筛选；2)DNA模板的提取：取筛选的金黄色葡萄球菌，培养，裂解，提取，作为PCR反应模板；3)PCR扩增；4)PCR扩增产物分析：将步骤3)制得的PCR扩增产物进行电泳和显色，在透射紫外灯下观察，如果扩增的核酸条带与对应基因型的肠毒素扩增长度一致，则可判断被检测的样品是含有相应葡萄球菌肠毒素基因型的阳性样品。与现有技术相比，步骤简单、价格低廉，而且准确度高。

主权项

1.餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法，所述方法包括以下步骤：1)菌株的培养鉴定与筛选；2)DNA模板的提取：取经筛选的金黄色葡萄球菌，用脑心浸出液肉汤增菌培养，然后，取该增菌液于离心管中，离心，弃上清，加入细菌裂解液，振荡混匀后，置金属浴恒温加热，然后室温离心，将上清液转移到新的离心管中，作为PCR反应模板，‑4℃保存备用；3)PCR扩增：根据需要检测的金黄色葡萄球菌肠毒素基因型的个数，取相同数量的PCR管，每支PCR管中所需PCR引物对，所述PCR引物对由引物A和引物B组成；然后进行PCR扩增，条件为：94℃预变性3分钟；94℃变性40秒；55℃退火40秒；72℃延伸1分钟；前述变性、退火和延伸共30个循环；最后72℃延伸10分钟；4℃保温10分钟，得扩增样品；4)PCR扩增产物分析：将步骤3)制得的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，取5μL扩增产物与2μL质量比为0.25％的溴酚蓝加样缓冲液混合，混匀之后点样于含溴化乙锭的2％琼脂糖凝胶中进行电泳和显色，在透射紫外灯下观察，如果扩增的核酸条带与对应基因型的肠毒素扩增长度一致，则可判断被检测的样品是含有相应金黄色葡萄球菌肠毒素基因型的阳性样品。