[发明专利]餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法

说明书

本发明提供了餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法，步骤为：1)菌株的培养鉴定与筛选；2)DNA模板的提取：取筛选的金黄色葡萄球菌，培养，裂解，提取，作为PCR反应模板；3)PCR扩增；4)PCR扩增产物分析：将步骤3)制得的PCR扩增产物进行电泳和显色，在透射紫外灯下观察，如果扩增的核酸条带与对应基因型的肠毒素扩增长度一致，则可判断被检测的样品是含有相应葡萄球菌肠毒素基因型的阳性样品。与现有技术相比，步骤简单、价格低廉，而且准确度高。

技术领域

本发明属于细菌分子检测领域，具体是餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法。

背景技术

餐饮是人们赖以生存的基础，随着生活节奏的加快，工作压力的增加，特别是互联网销售的突起，人们对于大众化餐饮的需求每年都在呈现上升趋势，线上订餐已经成为一种流行。而餐饮中主要的致病菌之一便是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，其营养要求不高，耐盐性强，在多数种类的食品中均可存活，故食品受其污染的机会很多，如果条件适合，还会大量繁殖并产生足够剂量的肠毒素，这些毒性物质与食源性葡萄球菌中毒密切相关，是引起人类疾病的主要致病因子。据美国疾病控制中心报告，在美国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒数量仅次于大肠埃希菌，居第2位，占细菌性食物中毒的33％，而在加拿大则占45％。日本的调查结果表明，平均32.5％的食品存在金黄色葡萄球菌的污染。2010—2012年北京市共报告细菌性食物中毒27起,其中金黄色葡萄球菌食物中毒占22％。金黄色葡萄球菌是一种条件致病菌微生物，其产生的肠毒素(SE)是引起食物中毒的主要原因，其中50％以上的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素(SE)。

金黄色葡萄球菌引起的食物中毒除了最早被人们发现和熟知的SEA外，目前已发现的肠毒素有20多种血清型，常见的SE为11种，分别为SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SEH、SEI、SER、SES和SET。肠毒素以SEA最为常见(约占75％)，其次是SED。一般认为，SEA的毒性最强，由它引起的食物中毒的报道也最多，携带肠毒素基因的金黄色葡萄球菌可产生一种或多种肠毒素，但是，一株金黄色葡萄球菌如果产生多种肠毒素，却往往以某一型的肠毒素为主，大多数时候引起食物中毒的是SEA-SEE这几种肠毒素。当前很多国家都就其国内金黄色葡萄球菌分离株肠毒素基因型的分布作了调查，但是不同报道的各型食源性金黄色葡萄球菌肠毒素所占的比例在各研究中都有所不同。迄今为止今，对已发现的金黄色葡萄球菌肠毒素的系统分型鉴定方法仍鲜有报道。

目前，针对金黄色葡萄球菌肠毒素的检测分型的方法技术主要有：基于病毒抗原、抗体反应的免疫学方法和包括病毒分离、病毒抗原和基因组DNA的核酸检测技术，以及传统的动物试验和新兴的生物传感器技术等。这些年新兴发展的PCR技术能在数小时内使靶序列扩增上百万倍，并可直接进行样品检测，以其快速、灵敏、特异性强、操作简便、重复性好等优点，被广泛应用于生命科学等各个领域。利于PCR技术可快速检测餐饮产品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因型，相比于其它的检测与分型方法具有步骤简便、价格低廉和准确性高等优点，并且检测与分型的时间减少为几个小时。

金黄色葡萄球菌是作为引起食物中毒最普遍的细菌之一，其分布的广泛性、新型肠毒素基因产生的复杂与多样性、肠毒素强的耐热特性，使金黄色葡萄球菌肠毒素功能与检测的研究需求变得尤为突出。加强食品原料中金黄色葡萄球菌肠毒素检测与评价，发展金黄色葡萄球菌肠毒素检测新型技术，成为餐饮食品安全控制的迫切需要。

发明内容

本发明的目的在于提供餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法，步骤简单、价格低廉，而且准确度高。

本发明提供的餐饮食品中的一种金黄色葡萄球菌肠毒素基因型快速检测方法，包括以下步骤：

1)菌株的培养鉴定与筛选；

2)DNA模板的提取：