[发明专利]一种人工改造的DNA分子、质粒载体及其制备方法在审
| 申请号： | 201810195006.7 | 申请日： | 2018-03-09 |
| 公开（公告）号： | CN108410898A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 夏海锋;杜夜星;曹小贺 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/62 |
| 代理公司： | 南京禹为知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王晓东 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人工改造的DNA分子、质粒载体及其制备方法。利用本发明构建的质粒载体可以直接将目的蛋白装载于本发明所述载体上，目的蛋白与本发明制备的载体连接后，就形成了intein的C端断裂关键的三个氨基酸Cys‑Phe‑Asn(CFN)。由于在应用Npu split intein进行目的蛋白的纯化时，需要将intein的C片段(IC)与目的蛋白通过PCR重叠技术融合，该过程操作复杂、耗时长、每一种目的蛋白都需要进行融合。本发明目的蛋白可直接与本发明制备的质粒载体连接，即可将IC与目的蛋白融合，操作简单，可以重复使用，且IC和目的蛋白之间避免了引入其他氨基酸。 | ||
| 搜索关键词： | 目的蛋白 质粒载体 制备 人工改造 氨基酸 融合 过程操作 载体连接 重叠技术 构建 断裂 耗时 装载 引入 应用 | ||
【主权项】：
1.一种人工改造的DNA分子，其特征在于：包括，在野生型内含肽Npu split intein的C片段基因的3’端人工添加碱基序列，所述人工添加碱基序列，为在利用野生型内含肽Npu split intein基因片段3’端原有序列基础上人工添加碱基序列设计出XcmI酶切位点的基因编码序列，并在所述XcmI酶切位点的序列内部设计出半胱氨酸基因编码序列，得到所述人工改造的DNA分子，所述的人工改造的DNA分子在经过XcmI酶切后，其3’端酶切位点处暴露出半胱氨酸基因编码序列。
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