[发明专利]在CRISPR/CAS9基因编辑中提高同源修复效率的方法在审
申请号: | 201810191682.7 | 申请日: | 2018-03-08 |
公开(公告)号: | CN108441519A | 公开(公告)日: | 2018-08-24 |
发明(设计)人: | 李岩;于坤;连正兴;邓守龙;连玲 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | C12N15/90 | 分类号: | C12N15/90 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王文君;黄爽 |
地址: | 100193 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明提供一种在CRISPR/CAS9基因编辑中提高同源修复效率的新方法,其是利用CRISPR/CAS9系统进行基因编辑,通过将MTR值控制在1×105‑5×105的范围内,来提高同源修复效率。其中,所述MTR值为待敲入的外源基因DNA的摩尔数与待打靶基因摩尔数的比值。本发明依据细胞自身的同源修复机制和细胞周期特点,在基因编辑过程中通过增加修复模板DNA的用量,为基因准确修复提供丰富的模板,进而减少非同源末端连接的比例,使得修复的平衡更倾向于同源修复。本方法可使体外培养体细胞的基因修复效率提升到90%以上,比国际现行方法高出30%,具有广阔的应用前景。 | ||
搜索关键词: | 同源 基因 修复 修复效率 摩尔数 非同源末端连接 基因修复 体外培养 外源基因 细胞周期 效率提升 模板DNA 体细胞 细胞 平衡 应用 | ||
【主权项】:
1.在CRISPR/CAS9基因编辑中提高同源修复效率的方法,其特征在于,利用CRISPR/CAS9系统进行基因编辑,通过将MTR值控制在1×105‑5×105的范围,来提高同源修复效率;其中,所述MTR值为待敲入的外源基因DNA的摩尔数与待打靶基因摩尔数的比值。
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