[发明专利]一种高效分离硅藻的新方法

摘要

本发明公开了一种高效分离硅藻的新方法，主要包括配置培养液以及硅藻的分离及纯化的步骤，其中，硅藻的分离及纯化包括采集含有硅藻的水样、用筛绢网过滤水样、水样杀菌处理、加富培养硅藻、计数硅藻的密度、分离硅藻、将含有硅藻的试管置于适宜的条件下培养、镜检新分离的硅藻种，若无其他生物及杂菌，则分离成功，本发明的优点在于所用时间短、操作简单、避免了目标硅藻受菌污染及转移过程中存在成功概率以影响工作效率的问题，整体上可大大提高微藻分离、提纯的工作效率。其分离效果好、所得藻密度高,适用于从自然水体、养殖水体、受菌污染或其他杂藻污染的硅藻的分离纯化，因此具备良好的应用前景。

主权项

1.一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于包括以下配制步骤：步骤一：配置培养液，其中，所述培养液包括I液和II液；1.1配置I液：硝酸钠4-6g、尿素1-3 g、磷酸二氢钾0.5-1.5g、柠檬酸铁0.2-0.4g、硫酸锰0.01-0.03g、EDTA-Na20.5-1.5g、维生素B1 10-30 mg、维生素B12 0.05-0.15mg、纯净水50-150mL；1.2配置II液：硅酸钠5-7g, 纯净水50-150mL；1.3按照1/1000比例分别加入I液及II液，摇动混均营养盐及补充煮沸消耗的O2及CO2，以获得培养液；步骤二：硅藻的分离及纯化；2.1用采水器采取褐色的含有硅藻的养虾池塘水样；2.2经300-500目筛绢网过滤水样，去掉硅藻的敌害浮游动物；2.3水样杀菌处理，按照比例往水样中加入青霉素200-300mg/L、卡那霉素100-140mg/L、链霉素100-140mg/L，摇匀，放置12小时,去除水样中的细菌；2.4将水样盛于三角烧瓶中，加入硅藻培养液，给硅藻充足的营养盐，即加富培养硅藻3-5天；2.5用血球计数板计数微藻细胞的密度，并稀释至藻细胞密度为 300-500个/ml；2.6镜检分离硅藻，把含有硅藻的水样摇匀，用移液枪吸取水样8-12微升，分3-5等分滴在常规载玻片之上的特制载玻片上，置于10倍生物显微镜下观察，不盖盖玻片：如果该水滴只有1个目标硅藻细胞而没有其他生物，把该特制载玻片连同水滴放进装有4-6毫升硅藻培养液的试管中；如果该水滴中含有目标硅藻同时也含有杂生物n个，则在该水滴上加入n个2.5μl消毒水或培养液，再用另一消毒枪头搅动混均水样并吸取该水样，分为每滴2.5μl的水滴滴在载玻片之上的特制载玻片上；再次镜检，将仅含有目标硅藻的特制载玻片连同水滴放进盛有培养液的试管中，重复操作20个样品以上；2.7将试管置于光照培养箱里，控制温度24-28℃、光照度为60-80μmol/m2·S-1，培养5-10天；2.8试管底部出现褐色，用消毒吸管吸取水样置于消毒的载玻片上并盖上经消毒的盖玻片，置于显微镜下观察，若只有一种硅藻，没有杂藻、细菌和真菌等其他生物，表明分离成功。