[发明专利]一种高效分离硅藻的新方法

说明书

本发明公开了一种高效分离硅藻的新方法，主要包括配置培养液以及硅藻的分离及纯化的步骤，其中，硅藻的分离及纯化包括采集含有硅藻的水样、用筛绢网过滤水样、水样杀菌处理、加富培养硅藻、计数硅藻的密度、分离硅藻、将含有硅藻的试管置于适宜的条件下培养、镜检新分离的硅藻种，若无其他生物及杂菌，则分离成功，本发明的优点在于所用时间短、操作简单、避免了目标硅藻受菌污染及转移过程中存在成功概率以影响工作效率的问题，整体上可大大提高微藻分离、提纯的工作效率。其分离效果好、所得藻密度高,适用于从自然水体、养殖水体、受菌污染或其他杂藻污染的硅藻的分离纯化，因此具备良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种高效分离硅藻的新方法，尤其是涉及硅藻的快速分离、纯化。

背景技术

微藻的培养、应用，首先需要藻种。藻种最先都是从天然水域混杂的生物群中，运用一定的方法分离出来，获得单种培养，并保存下来，供培养使用。分离、纯化微藻是其进行科学研究不可缺少的技术。硅藻是海洋有机物的主要生产者之一，也是海洋初级生产力之一；同时硅藻也是海洋动物及其幼体的直接或间接的饵料。自然海域中国毛虾的全年食物中，硅藻占54%。鲱鱼、沙丁鱼等幼鱼也以硅藻为主要食物。可见，海洋经济动物产量的高低与硅藻的数量有着密切的关系。随着海水养殖业的发展，人工大量培养硅藻，以解决经济海产动物人工育苗幼体的饵料，这是提高种苗产量必不可少的技术关键。另外，目前硅藻在医药、工业上也有广泛的用途，可以作为过滤剂、吸附剂、造纸、橡胶、化妆品和涂料的填充剂等，以及纳米材料、建筑材料和保温材料等。硅藻的分离纯化是其利用必须首先解决的问题。

现有技术主要有如下的分离方法：样品系列稀释法、水滴分离法、微吸管分离法、固体培养基分离法。

1.稀释分离法：a.原理：在无菌操作的条件下,对分离的样品采用逐步稀释的方法,边稀释,边在显微镜下镜检,直到视野中每滴样品只含1个细胞时,即停止稀释，开始分接培养。b.方法：首先在第一个试管中加入要分离的藻液样品,其他试管中加入等量培养液,加入培 养液的体积根据分离样品的具体情况而定(如10ml),从第一试管中吸取和培养液同体积的藻液样品(10mL)加到第二支试管中,充分振荡摇匀,此时藻液被稀释了2倍,再用一支新的消毒的移液管,吸取第二支试管中的稀释藻液(10mL)加入第三支试管中,如前振荡,使均匀稀释,此时藻液被稀释了4倍,以后的试管依次采用同样的方法稀释,直到镜检每滴稀释样品中只有1个细胞,可以用这样的稀释藻液进行培养,最终的稀释液种分装到不同的试管中,用棉塞塞好试管,把试管 放在有漫射阳光的地方,每日轻轻摇动几次,发现试管中有藻色后进行镜检,如镜检到单种则表示分离成功,此时已达到了分离、纯化的目标,可进行扩大培养。c.应用概况：样品系列稀释分离法设备简单,操作简便,工作量小,但是这个技术有很大的盲目性,分离的样品很可能来自两个或更多的细胞,分离的微藻单种不一定是目标种,但可能分离到其他种或新种,尤其对于从天然水域采取水样的初步分离非常适合,而且对于微藻的种类、大小没有限制。

2.微吸管分离法：a原理:在无菌操作条件下,用极细的微吸管,在显微镜下把目标藻样从一个玻片移到另一个玻片,采用同样的方法反复操作,直到镜检水滴 中只有目标单种为止。b方法：在微吸管的顶端套一条长约8cm的医用乳胶管,分离操作时,用手指压紧乳胶管 以控制吸取动作。将分离的水样置于载玻片上,在显微镜下把微吸管口对准要分离的藻细胞,放松手指,藻细胞被吸入微吸管；接着把吸出的水滴放在另一载玻片上,显微镜检查水滴中是否只吸到藻细胞,经过如此再反复操作,直至达到单种分离的目标。然后把分离出的藻细胞冲入预先装有培养液的试管内,放在适宜的光照下培养,试管有藻色后镜检,培养为单种的试管,其他不合格的弃掉。c应用：微吸管分离法的特点是易找到特定的种类,所用的设备也较简单,但操作技术难度较大,往往吸取一个单细胞需要几次至十几次才能成功,而且适于分离个体较大或丝状的藻类,如螺旋 藻、骨条藻等,较小的藻类用此方法比较困难。