[发明专利]一种高效分离硅藻的新方法

权利要求书

1.一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于包括以下配制步骤：

步骤一：配置培养液，其中，所述培养液包括I液和II液；

1.1配置I液：硝酸钠4-6g、尿素1-3 g、磷酸二氢钾0.5-1.5g、柠檬酸铁0.2-0.4g、硫酸锰0.01-0.03g、EDTA-Na20.5-1.5g、维生素B1 10-30 mg、维生素B12 0.05-0.15mg、纯净水50-150mL；

1.2配置II液：硅酸钠5-7g, 纯净水50-150mL；

1.3按照1/1000比例分别加入I液及II液，摇动混均营养盐及补充煮沸消耗的O2及CO2，以获得培养液；

步骤二：硅藻的分离及纯化；

2.1用采水器采取褐色的含有硅藻的养虾池塘水样；

2.2经300-500目筛绢网过滤水样，去掉硅藻的敌害浮游动物；

2.3水样杀菌处理，按照比例往水样中加入青霉素200-300mg/L、卡那霉素100-140mg/L、链霉素100-140mg/L，摇匀，放置12小时,去除水样中的细菌；

2.4将水样盛于三角烧瓶中，加入硅藻培养液，给硅藻充足的营养盐，即加富培养硅藻3-5天；

2.5用血球计数板计数微藻细胞的密度，并稀释至藻细胞密度为 300-500个/ml；

2.6镜检分离硅藻，把含有硅藻的水样摇匀，用移液枪吸取水样8-12微升，分3-5等分滴在常规载玻片之上的特制载玻片上，置于10倍生物显微镜下观察，不盖盖玻片：

如果该水滴只有1个目标硅藻细胞而没有其他生物，把该特制载玻片连同水滴放进装有4-6毫升硅藻培养液的试管中；

如果该水滴中含有目标硅藻同时也含有杂生物n个，则在该水滴上加入n个2.5μl消毒水或培养液，再用另一消毒枪头搅动混均水样并吸取该水样，分为每滴2.5μl的水滴滴在载玻片之上的特制载玻片上；

再次镜检，将仅含有目标硅藻的特制载玻片连同水滴放进盛有培养液的试管中，重复操作20个样品以上；

2.7将试管置于光照培养箱里，控制温度24-28℃、光照度为60-80μmol/m2·S-1，培养5-10天；

2.8试管底部出现褐色，用消毒吸管吸取水样置于消毒的载玻片上并盖上经消毒的盖玻片，置于显微镜下观察，若只有一种硅藻，没有杂藻、细菌和真菌等其他生物，表明分离成功。

2.根据权利要求1所述的一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于：步骤一中，配置I液：硝酸钠5g、尿素2g、磷酸二氢钾1g、柠檬酸铁0.3g、硫酸锰0.02g、EDTA-Na21g、维生素B120mg、维生素B12 0.1mg、纯净水100mL，配置II液：硅酸钠 6g, 纯净水100mL，培养液的配置应逐一称量，逐一溶解，水温应低于60℃后才能加入维生素。

3.根据权利要求2所述的一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于：步骤二2.2中，经400目筛绢网过滤水样，去掉硅藻的敌害浮游动物。

4.根据权利要求1或3所述的一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于：步骤二2.3中，配置青霉素250mg/L、卡那霉素120mg/L、链霉素120mg/L。

5.根据权利要求1或3所述的一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于：步骤二2.4中，水样体积不超过容器的2/3,放置在温度24-28℃、80μmol/m2·S-1 的光照下预培养3-5天，增加水样中的硅藻密度，便于分离筛选。

6.根据权利要求1或3所述的一种高效分离硅藻的新方法，其特征在于：步骤二2.5中，藻细胞密度为 400个/ml。