[发明专利]一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法

摘要

本发明涉及一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法，属于胡杨叶片再生方法技术领域。本发明通过对基础培养基及培养条件的优化，克服以往胡杨传代三代以上就发生叶片黄化、难以再生的现象。本发明在改良组培苗培育条件的基础上，以叶片为外植体，经过不定芽诱导、继代培养、壮苗培养、生根培养等技术环节，最终建立了胡杨叶片高效再生诱导再生植株的方法体系。利用本方法能够实现胡杨离体叶片的高效再生，具有重现性好、生产效率高等优点，不定芽再生率可达98％以上，有效克服了胡杨在自然条件下实生繁殖困难，实现了离体快繁，并为实现胡杨的遗传转化及种植资源改良奠定了基础。

主权项

1.一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法，其特征在于包括以下步骤：1)、外植体的获得取带腋芽的胡杨茎段作为外植体，先用洗洁精浸泡，再依次进行自来水冲洗、无菌水冲洗、乙醇浸泡、无菌水冲洗、消毒、无菌水清洗，最后用无菌吸水纸吸去表面水分，切段得带腋芽的胡杨茎段；2)、无菌试管苗的获得及继代将步骤1)获得的茎段接种于继代培养基上培养得到无菌试管苗，并进行不定芽的继代增殖；所述的继代培养基为改良的MS培养基+6‑BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，继代培养基pH值为5.8～6.2；3)、壮苗培养将步骤2)所得的无菌试管苗接种在壮苗培养基上，以促进苗及叶片的生长，培养40‑50天得到独立的试管苗；所述的壮苗培养基为改良的MS培养基+6‑BA0.1～0.5mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，培养基pH为5.8～6.2；4)、不定芽的诱导及继代在步骤3)所得的独立的试管苗上部取长势良好的叶片为材料，切成小块后叶片背面朝下接种在不定芽诱导培养基表面，诱导产生不定芽；所述的不定芽分化培养基为改良的MS培养基+NAA 0.01～0.1mg/L+6‑BA 0.1～1.0mg/L+TDZ 1.0～2.5mg/L+PVP 50～300mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L，不定芽分化培养基的pH为5.8～6.2；5)、壮苗培养待步骤4)得到的不定芽生长到1～1.5cm时，切取不定芽，转接到步骤3)所述的壮苗培养基中进行培养，最终发育成为独立生长的健壮的试管苗；6)、生根培养待步骤5)的试管苗叶色浓绿、苗高长至4～6cm时，将其接种到生根培养基上诱导生根，最终得到完整的胡杨试管苗。