[发明专利]一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法

权利要求书

1.一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)、外植体的获得

取带腋芽的胡杨茎段作为外植体，先用洗洁精浸泡，再依次进行自来水冲洗、无菌水冲洗、乙醇浸泡、无菌水冲洗、消毒、无菌水清洗，最后用无菌吸水纸吸去表面水分，切段得带腋芽的胡杨茎段；

2)、无菌试管苗的获得及继代

将步骤1)获得的茎段接种于继代培养基上培养得到无菌试管苗，并进行不定芽的继代增殖；

所述的继代培养基为改良的MS培养基+6-BA 0.1～1.0mg/L+NAA 0.05～0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，继代培养基pH值为5.8～6.2；

3)、壮苗培养

将步骤2)所得的无菌试管苗接种在壮苗培养基上，以促进苗及叶片的生长，培养40-50天得到独立的试管苗；

所述的壮苗培养基为改良的MS培养基+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.1～1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，培养基pH为5.8～6.2；

4)、不定芽的诱导及继代

在步骤3)所得的独立的试管苗上部取长势良好的叶片为材料，切成小块后叶片背面朝下接种在不定芽诱导培养基表面，诱导产生不定芽；

所述的不定芽分化培养基为改良的MS培养基+NAA 0.01～0.1mg/L+6-BA 0.1～1.0mg/L+TDZ 1.0～2.5mg/L+PVP 50～300mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L，不定芽分化培养基的pH为5.8～6.2；

5)、壮苗培养

待步骤4)得到的不定芽生长到1～1.5cm时，切取不定芽，转接到步骤3)所述的壮苗培养基中进行培养，最终发育成为独立生长的健壮的试管苗；

6)、生根培养

待步骤5)的试管苗叶色浓绿、苗高长至4～6cm时，将其接种到生根培养基上诱导生根，最终得到完整的胡杨试管苗。

2.按照权利要求1所述的一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法，其特征在于步骤1)所述的外植体的获得的具体处理步骤为：取带腋芽的胡杨茎段作为外植体，用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡10min，自来水冲洗20～30min，转入超净工作台，用无菌水冲洗3次，在75％乙醇中浸泡30～60s，无菌水冲洗3次后，用0.1～0.2％升汞消毒5～8min，无菌水清洗3次后，再用无菌吸水纸吸去表面水分，切成0.8～1.2cm带腋芽的茎段。

3.按照权利要求1所述的一种胡杨叶片高频诱导再生植株的方法，其特征在于步骤2)所述的在继代培养基上的培养条件、步骤3)所述的壮苗培养基上的培养条件相同，均为：培养温度25±2℃，光照强度1500～2000lx，光照周期为12h/12h。