[发明专利]一种酶法制备乙酰辅酶A的方法有效
| 申请号： | 201810095650.7 | 申请日： | 2018-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN108410896B | 公开（公告）日： | 2020-02-21 |
| 发明（设计）人： | 乐易林;孙建中;倪黎 | 申请（专利权）人： | 江苏大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P19/32;C12N9/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212013 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于酶工程领域，具体涉及一种酶法制备乙酰辅酶A的方法。本发明利用酶法制备乙酰辅酶A的方法具体如下：首先将新阿波罗菌中的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因，克隆到大肠杆菌表达载体中，制备重组酶丙酮酸铁氧化还原蛋白酶；然后，以丙酮酸钠、CoA等物质为原料，配制一定pH值的反应液，加入上述重组酶，置于70‑90℃无氧条件下反应，得到含有乙酰辅酶A的混合液。本发明采用的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶，无氧条件下稳定性好，且耐高温不易失活，无需进行酶固定化，合成乙酰辅酶A操作简单；该催化反应具有很高专一性，无副产物产生，无需进行额外繁琐的纯化工艺，乙酰辅酶A的合成速率达15.01μmol/min/mg，有望用于工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 法制 乙酰 辅酶 方法 | ||
【主权项】：
1.一种酶法制备乙酰辅酶A的方法，其特征在于，所述方法中使用的酶为重组酶丙酮酸铁氧化还原蛋白酶；包括以下步骤：（1）制备重组酶丙酮酸铁氧化还原蛋白酶：将新阿波罗菌中的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因克隆到大肠杆菌表达载体中，进行重组表达并纯化获得的重组酶丙酮酸铁氧化还原蛋白酶；（2）合成乙酰辅酶A：配制一定pH值的反应液，将反应液加入到密封瓶中，通入气体一段时间后，在上述反应液中加入重组酶PFOR，将得到的混合反应液，置于70‑90℃条件下反应，得到含有乙酰辅酶A的混合液。
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