[发明专利]胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法及用途

摘要

本发明提供一种胡萝卜组织及愈伤细胞不对称还原p‑苯丙酮类化合物的方法，包括：p‑苯丙酮类化合物标准品的制备、胡萝卜组织提取、培养基的制备、胡萝卜组织对底物的还原、胡萝卜愈伤培养、培养液的缓冲、胡萝卜愈伤对底物的不对称还原。本发明还提供上述应用。相对于现有技术，本发明对手性药物的制备及绿色化学的实现具有重大的经济和生态学意义。

主权项

1.胡萝卜组织或愈伤不对称还原p‑苯丙酮类化合物的方法，其特征是，包括以下步骤：（1）p‑苯丙酮类化合物标准品的制备：取一定量的 p‑苯丙酮类化合物溶于溶剂甲醇中分多次加入还原剂KBH4以一锅法在冰水浴中进行反应，以石油醚∶乙酸乙酯=9∶1为展开剂点板，直至反应完全后，加适量冰水除去多余的还原剂KBH4，再用稀HCl调节pH值至中性，用萃取剂无水乙醚萃取产物三次，每次20ml萃取剂，之后加入干燥剂（无水MgSO4）干燥，过滤旋蒸浓缩后得到p‑苯丙酮类化合物标准品；（2）胡萝卜组织提取：选取胡萝卜的韧皮部，用清水冲洗以除去表面污渍，在消毒剂（75％乙醇）里浸泡0.5 min，取出用无菌水冲洗2次后放入漂白剂（10% NaClO溶液）中浸泡20 min后取出，无菌水冲洗多次后，切成小块备用；（3）培养基的制备：取40 g （MS）培养基加水1000 ml加热溶解后，分装100 ml容量瓶，制成培养液，培养液每瓶25 ml，高温灭菌后冷却至室温备用；（4）胡萝卜组织对底物的还原：加入一定量备好的胡萝卜韧皮部组织，并加入相应底物（p‑苯丙酮类化合物）进行摇床培养，5天后取出，离心取上清液；（5）胡萝卜愈伤的培养：在MS培养基加入0.7‑0.8%的琼脂和3 mg/l的NAA生长素加热溶解后灭菌，倒平板备用，将清洗灭菌后的胡萝卜韧皮部切成薄片后，置于培养皿密封后放于25 ℃全天候气候培养箱中培养一个月，有淡黄色颗粒的愈伤细胞生成，将愈伤转接至传代培养基（NAA含量减半），继续培养15‑30天，愈伤大量生成；（6）培养液的缓冲：将制备好的培养液加入一定浓度的缓冲液，调节PH值为弱酸性；（7）胡萝卜愈伤对底物的不对称还原：取2 g愈伤细胞加入20 ml 缓冲后的培养液中摇床48h后加入10mg底物进行反应，4天后取出，离心萃取。