[发明专利]胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法及用途

权利要求书

1.胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）p-苯丙酮类化合物标准品的制备：取一定量的 p-苯丙酮类化合物溶于溶剂甲醇中分多次加入还原剂KBH₄以一锅法在冰水浴中进行反应，以石油醚∶乙酸乙酯=9∶1为展开剂点板，直至反应完全后，加适量冰水除去多余的还原剂KBH₄，再用稀HCl调节pH值至中性，用萃取剂无水乙醚萃取产物三次，每次20ml萃取剂，之后加入干燥剂（无水MgSO₄）干燥，过滤旋蒸浓缩后得到p-苯丙酮类化合物标准品；

（2）胡萝卜组织提取：选取胡萝卜的韧皮部，用清水冲洗以除去表面污渍，在消毒剂（75％乙醇）里浸泡0.5 min，取出用无菌水冲洗2次后放入漂白剂（10% NaClO溶液）中浸泡20 min后取出，无菌水冲洗多次后，切成小块备用；

（3）培养基的制备：取40 g （MS）培养基加水1000 ml加热溶解后，分装100 ml容量瓶，制成培养液，培养液每瓶25 ml，高温灭菌后冷却至室温备用；

（4）胡萝卜组织对底物的还原：加入一定量备好的胡萝卜韧皮部组织，并加入相应底物（p-苯丙酮类化合物）进行摇床培养，5天后取出，离心取上清液；

（5）胡萝卜愈伤的培养：在MS培养基加入0.7-0.8%的琼脂和3 mg/l的NAA生长素加热溶解后灭菌，倒平板备用，将清洗灭菌后的胡萝卜韧皮部切成薄片后，置于培养皿密封后放于25 ℃全天候气候培养箱中培养一个月，有淡黄色颗粒的愈伤细胞生成，将愈伤转接至传代培养基（NAA含量减半），继续培养15-30天，愈伤大量生成；

（6）培养液的缓冲：将制备好的培养液加入一定浓度的缓冲液，调节PH值为弱酸性；

（7）胡萝卜愈伤对底物的不对称还原：取2 g愈伤细胞加入20 ml 缓冲后的培养液中摇床48h后加入10mg底物进行反应，4天后取出，离心萃取。

2.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，p-苯丙酮类化合物选自对甲基苯丙酮、对乙基苯丙酮、对氯苯丙酮、对溴苯丙酮。

3.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，p-苯丙酮类化合物的投入质量与溶剂体积之比为1:10-1:15。

4.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，培养基选用MS培养基，培养基的质量与水的体积之比为1:25-1:30。

5.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，胡萝卜组织的加入量为5g，胡萝卜愈伤的加入量为2g。

6.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，底物的浓度为0.008g/ml。

7.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，缓冲液是磷酸。

8.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，摇床转速为85-160 r/min。

9.根据权利要求1所述的胡萝卜组织或愈伤不对称还原p-苯丙酮类化合物的方法，其特征是，反应温度为25-30℃。

10.胡萝卜组织及愈伤在不对称还原p-苯丙酮类化合物方面的用途。