[发明专利]一种制备人胆囊癌吉西他滨耐药细胞系的方法有效
| 申请号： | 201810088795.4 | 申请日： | 2018-01-30 |
| 公开（公告）号： | CN108315303B | 公开（公告）日： | 2021-03-30 |
| 发明（设计）人： | 锁涛;刘厚宝;王刚 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属中山医院;麦递途医疗科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 于晓菁 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种制备人胆囊癌吉西他滨耐药细胞系的方法，取对数生长期的人胆囊癌细胞接种在含新生胎牛血清的DMEM培养液中，置于饱和湿度培养箱中培养，在培养液中加入吉西他滨进行诱导，待细胞恢复正常生长时，浓度递增，当细胞能在0.5μmol/L浓度下正常生长、传代时，用1.0μmol/L吉西他滨冲击培养，立即更换吉西他滨浓度为0.5μmol/L的培养基培养5～10天，待细胞稳定生长、传代时，再次冲击，直至细胞能在10.0μmol/L的吉西他滨中生长，获得能够在含有10μmol/L吉西他滨的培养体系中稳定生长、传代的人胆囊癌吉西他滨耐药细胞系。本发明的方法简便易行、建立时间短；且耐药指数均达10以上。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 胆囊 癌吉西 耐药 细胞系 方法 | ||
【主权项】：
1.一种制备人胆囊癌吉西他滨耐药细胞系的方法，其特征在于包括如下步骤：取对数生长期的人胆囊癌细胞接种在含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中，置于37℃、含有CO2体积百分比浓度为5％的饱和湿度培养箱中培养，在上述含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中加入吉西他滨进行诱导，吉西他滨的初始浓度为0.2μmol/L，待细胞恢复正常生长时，以0.1μmol/L浓度递增，当细胞能在含吉西他滨浓度为0.5μmol/L、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液下正常生长、传代时，用含吉西他滨浓度为1.0μmol/L、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液冲击培养12h，然后更换含吉西他滨浓度为0.5μmol/L、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液培养5～10天，待细胞稳定生长、传代时，再次用含1.0μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液冲击培养12h，直至细胞能在含有1.0μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中生长，然后以1.0μmol/L的浓度递增，当细胞能在含有4.0μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中正常生长、传代时，用含有10.0μmol/L的吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液冲击诱导12h，再更换含有吉西他滨浓度为4.0μmol/L、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液培养5～10天，待细胞稳定生长、传代时，再次用含1.0μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液冲击培养12h，直至细胞能在含有10.0μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中生长，获得了能够在含有10μmol/L吉西他滨、含体积百分比浓度为20％新生胎牛血清的DMEM培养液中稳定生长、传代的人胆囊癌吉西他滨耐药细胞系。
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