[发明专利]一种低pH孵育病毒灭活的验证方法

摘要

本发明涉及一种低pH孵育灭活病毒的验证方法，选择指示病毒及其对应的宿主细胞；指示病毒扩增和纯化；病毒工作原液和样品的滴度测定；灭活病毒验证实验pH值的优化；低pH值孵育灭活病毒效果评估。本发明所提供的方法，能实现实验室摸拟基因工程药物生产工艺病毒灭活的全过程，优化了指示病毒的扩增、纯化工艺，使指示病毒工作原液滴度提高，pH值统一到7.0，质量稳定而益于后续操作，同时优化了低pH孵育的具体技术细节(如最优孵育pH值的确定，pH调节方式的优化等)，提高对常见的DNA病毒、RNA病毒、有包膜病毒和无包膜病毒灭活的有效性和实效性。

主权项

1.一种低pH孵育灭活病毒的验证方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选择指示病毒及其对应的宿主细胞：选择伪狂犬病毒、鼠白血病病毒、水疱性口炎病毒、猪细小病毒为指示病毒；选择指示病毒相对应的宿主细胞，伪狂犬病毒对应的为猪肾细胞，鼠白血病病毒对应的为猫星型细胞，水疱性口炎病毒对应的为非洲绿猴肾细胞细胞，猪细小病毒对应的为猪肾细胞；2)指示病毒扩增和纯化：常规扩增收样后超速离心换用新鲜无血清MEM培养基溶解，使其病毒滴度提高，pH值统一为7.0；3)病毒工作原液和样品的滴度测定：采用TCID50法或实时荧光定量RT‑PCR法进行滴度测定；4)灭活病毒验证实验pH值的优化：通过预实验确定了指示病毒最优的孵育pH以及pH值的最佳调节方式；5)低pH值孵育灭活病毒效果评估：用阳牲对照的病毒滴度减去实时取样样品中的病毒滴度，获得不同取样时间点的病毒灭活定量数据(LRV，log/ml)，若该时间点的LRV≥4，则低pH孵育该时间的灭活工艺灭活病毒有效。