[发明专利]一种提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法在审
| 申请号： | 201810065431.4 | 申请日： | 2018-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN108410895A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 谭锬;伍金月;唐艺菲;李娜 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 421001 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于基因工程技术领域，公开了一种提高DNA重组片段转化大肠杆菌效率的方法，即将PCR扩增得到的EGFP片段与pUC18质粒分别进行双酶切，用T4DNA连接酶对酶切后的EGFP片段和pUC18质粒进行连接，得到连接产物；DNA连接产物先加入1/5DNA连接产物体积的10M醋酸铵；然后加入上述混合物两倍体积的无水乙醇，室温静置25min‑1hr，10000g离心25min‑1hr；弃上清，加入5‑10μL 0.1M CaCl2，溶解管底的沉淀。本发明转化得到的大肠杆菌单克隆数目约是未处理组的2‑10倍；本发明减少了转化时感受态大肠杆菌的使用量。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 连接产物 转化 感受态大肠杆菌 基因工程技术 重组DNA片段 室温静置 无水乙醇 混合物 醋酸铵 双酶切 未处理 酶切 沉淀 溶解 | ||
【主权项】：
1.一种提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于，所述提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法将PCR扩增得到的EGFP片段与pUC18质粒双酶切，用T4DNA连接酶对酶切后的EGFP片段和pUC18质粒进行连接，得到连接产物；DNA连接产物中加入1/5连接产物体积的10M醋酸铵；然后加入上述混合物2倍体积的无水乙醇，室温静置25min‑1hr，10000g离心25min‑1hr；弃上清，加入5‑10μL 0.1M CaCl2，溶解管底的沉淀。
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