[发明专利]一种提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法在审
| 申请号： | 201810065431.4 | 申请日： | 2018-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN108410895A | 公开（公告）日： | 2018-08-17 |
| 发明（设计）人： | 谭锬;伍金月;唐艺菲;李娜 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙) 50230 | 代理人： | 包晓静 |
| 地址： | 421001 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 连接产物 转化 感受态大肠杆菌 基因工程技术 重组DNA片段 室温静置 无水乙醇 混合物 醋酸铵 双酶切 未处理 酶切 沉淀 溶解 | ||
1.一种提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于，所述提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法将PCR扩增得到的EGFP片段与pUC18质粒双酶切，用T4DNA连接酶对酶切后的EGFP片段和pUC18质粒进行连接，得到连接产物；DNA连接产物中加入1/5连接产物体积的10M醋酸铵；然后加入上述混合物2倍体积的无水乙醇，室温静置25min-1hr，10000g离心25min-1hr；弃上清，加入5-10μL 0.1M CaCl2，溶解管底的沉淀。
2.如权利要求1所述的提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于，所述用于重组DNA连接的EGFP片段摩尔数：pUC18质粒摩尔数≈8:1。
3.如权利要求1所述的提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于，所述连接之前需要：用PCR方法，扩增出pEGFP-C3载体上的EGFP片段；用HindⅢ和EcoRⅠ两种内切酶，双酶切EGFP片段和pUC18质粒，得到带有相同粘性末端的pUC18质粒和EGFP片段。
4.如权利要求1所述的提高重组DNA片段转化大肠杆菌效率的方法，其特征在于，所述连接反应得到的连接产物需要：用醋酸铵与乙醇沉淀DNA，然后用5-10μL 0.1M CaCl2溶解的DNA连接产物，并与10-100μL大肠杆菌感受态细胞混合；冰上放置30min，42℃水浴热激45-90sec，冰上放置2min；取0.4mL液体培养基加入上述混合物中，37℃，250rpm振荡培养1hr；将菌均匀涂布在含有0.125mg/mL IPTG、0.1mg/mL X-gal、0.1mg/mL Ampicillin的LB固体培养基上；37℃培养12-16hr。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南华大学，未经南华大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810065431.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
