[发明专利]一种用酵母表达系统生产重组草酸脱羧酶的方法及应用在审
| 申请号： | 201810031137.1 | 申请日： | 2018-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN108359661A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 汪小锋;汪卫;陈火晴;刘艳红;陈先桥 | 申请（专利权）人： | 武汉康复得生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/81 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种用酵母表达系统生产重组草酸脱羧酶的方法及应用。通过将真核微生物来源的草酸脱羧酶基因导入到酵母表达系统的宿主细胞中，构建能够高效分泌表达重组草酸脱羧酶的系列工程菌株，将重组菌株发酵培养，不同的重组菌分泌表达的草酸脱羧酶活力可达到5750‑9000IU/L。本发明的生产重组草酸脱羧酶的方法实现了草酸脱羧酶在酵母宿主细胞中高效重组分泌表达，重组草酸脱羧酶具有与天然宿主细胞制备的草酸脱羧酶相似的酶学性质。同时，本发明的重组草酸脱羧酶具有糖基化修饰，pH耐受范围宽，在胃肠环境中稳定性强，半衰期长；分泌表达的蛋白可溶，生产和纯化工艺简单，无内毒素污染，可广泛应用于生物医药、特殊医学配方食品和功能性食品加工等领域。 | ||
| 搜索关键词： | 草酸脱羧酶 酵母表达系统 分泌表达 生产重组 草酸脱羧酶基因 高效分泌表达 酵母宿主细胞 天然宿主细胞 内毒素 应用 功能性食品 生产和纯化 糖基化修饰 真核微生物 发酵培养 工程菌株 酶学性质 配方食品 生物医药 宿主细胞 胃肠环境 稳定性强 重组菌株 半衰期 重组菌 构建 可溶 耐受 制备 蛋白 医学 加工 污染 | ||
【主权项】：
1.一种通过酵母宿主细胞生产重组草酸脱羧酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建包含草酸脱羧酶基因的酵母表达的DNA载体，所述载体包括整合型表达载体或游离型表达载体中的至少一种，所述整合型表达载体含有编码选择性标记的基因和编码草酸脱羧酶的基因的表达盒，所述游离型表达载体含有编码选择性标记的基因和编码草酸脱羧酶的基因的游离质粒；2)将包含草酸脱羧酶基因的酵母表达的DNA载体导入酵母宿主细胞，经筛选和鉴定后，分离含有至少一个草酸脱羧酶基因拷贝的重组酵母宿主细胞；3)在培养基质中培养分离出的重组酵母宿主细胞，所述培养基质使重组酵母宿主细胞能够表达重组草酸脱羧酶，且表达产物能够分泌到培养基质中；4)从重组酵母宿主细胞培养基质中回收重组草酸脱羧酶。
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