[发明专利]一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法

摘要

本发明公开了一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法，其特征在于，主要包括以下步骤：产脲酶细菌的富集；分离纯化产脲酶细菌；产脲酶细菌的鉴定；产脲酶细菌的脲酶酶活力检测。钙质砂岩土介质上进行加固施工过程中，水泥等土木工程材料的大量使用，会对自然环境造成的长久不利影响，本发明提供了一种钙质砂中产脲细菌的高效分离与鉴定方法，为微生物加固钙质砂提供细菌材料，为MICP技术奠定了基础，能最大限度减少岩土加固施工过程中对环境的影响。

主权项

1.一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)产脲酶细菌的富集1.1)采集原位沙滩钙质砂样品，将取得的土样去除杂质、筛分处理，控制粒径小于0.85mm；按每份10g～20g分装于干净的试管中，贮藏于4℃环境；1.2)取步骤1.1)中贮藏时间不超过15天的新鲜钙质砂加入装有富集培养液的试管中，置于恒温振荡培养箱中进行培养；所述恒温振荡培养箱的温度范围为25～35℃；所述培养时间范围为14天；所述钙质砂与富集培养液的重量体积比(g︰mL)范围为1︰100～1︰200；1.3)将步骤1.2)中得到的培养液，加入到浓度为1.1mol/L的尿素溶液中，得到混合物A；使用电导率测试仪测定混合物A的电导率；所述培养液与尿素溶液的体积比为1︰9；当混合物A的电导率平均5分钟变化大于0.1ms/cm时，则表示产脲酶细菌的存在；所述有产脲酶细菌存在的混合物A为产物A；2)分离纯化产脲酶细菌2.1)取步骤1.3)中得到的产物A体积15～20ml涂布到分离培养基平板上，置于培养箱中进行培养；所述培养箱的温度范围为30℃；所述培养时间范围为15天；2.2)观察步骤2.1)中得到的产物B的菌落生长情况，挑取圆形黄色的单菌落划线到BUG+B鉴定培养基上进行培养；3)产脲酶细菌的鉴定3.1)使用接种环挑取步骤2.2)中的单菌落到鉴定培养液GN/GP-IF管壁上，并用接种环将细菌打散，使细菌与鉴定液混合，至比浊计上混浊度在90～95％之间；3.2)使用接种液用排枪将步骤3.1)中得到的产物C接种到鉴定培养板上，根据每个细菌的生长速度，在30℃的恒温振荡培养箱中培养1～7天，采用Biology Microstion微生物鉴定系统进行快速鉴定；4)产脲酶细菌的脲酶酶活力检测：将步骤3.2)中分离纯化所得巴氏芽孢杆菌产脲酶菌株分割成2mm×2mm×1mm块状胶体，检测脲酶酶活力。