[发明专利]一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法

说明书

本发明公开了一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法，其特征在于，主要包括以下步骤：产脲酶细菌的富集；分离纯化产脲酶细菌；产脲酶细菌的鉴定；产脲酶细菌的脲酶酶活力检测。钙质砂岩土介质上进行加固施工过程中，水泥等土木工程材料的大量使用，会对自然环境造成的长久不利影响，本发明提供了一种钙质砂中产脲细菌的高效分离与鉴定方法，为微生物加固钙质砂提供细菌材料，为MICP技术奠定了基础，能最大限度减少岩土加固施工过程中对环境的影响。

技术领域

本发明涉及微生物生态学与岩土工程技术交叉领域，具体是一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法。

背景技术

钙质砂(又称珊瑚礁砂)是岩土工程技术领域一种特殊的岩土介质。钙质砂颗粒中，粒径大于2mm的颗粒所占比例较低，主要有两种类型，一种为胶结的礁灰岩碎块，另一种为珊瑚断枝。由于珊瑚礁砂其的生物成因且形成过程中多未经长途搬运，保留了原生生物骨架中的细小孔隙等原因，形成的土颗粒多孔隙(含有内孔隙)、形状不规则、易破碎、颗粒易胶结等，使得其工程力学性质与一般陆相、海相沉积物相比有较明显的差异且随着沉积历史、地理区域而变化。

微生物加固土作为近年来环境岩土较新的研究领域，其核心技术即为MICP(Microbially Induced Calcite Precipitation，微生物诱导碳酸钙沉淀)，通过微生物作用，以一种绿色环保的方式，分解尿素，在土体颗粒之间形成碳酸钙沉淀，从而达到土体固化，提高土体刚度和强度。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中存在的问题，提供一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法。

为实现本发明目的而采用的技术方案是这样的，一种钙质砂中产脲酶细菌的高效分离与鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)产脲酶细菌的富集

1.1)采集原位沙滩钙质砂样品，将取得的土样去除杂质、筛分处理，控制粒径小于0.85mm；按每份10g～20g分装于干净的试管中，贮藏于4℃环境；

1.2)取步骤1.1)中贮藏时间不超过15天的新鲜钙质砂加入装有富集培养液的试管中，置于恒温振荡培养箱中进行培养；

所述恒温振荡培养箱的温度范围为25～35℃；

所述培养时间范围为14天；

所述钙质砂与富集培养液的重量体积比(g︰mL)范围为1︰100～1︰200；

1.3)将步骤1.2)中得到的培养液，加入到浓度为1.1mol/L的尿素溶液中，得到混合物A；使用电导率测试仪测定混合物A的电导率；

所述培养液与尿素溶液的体积比为1︰9；

当混合物A的电导率平均5分钟变化大于0.1ms/cm时，则表示产脲酶细菌的存在；

所述有产脲酶细菌存在的混合物A为产物A；

2)分离纯化产脲酶细菌

2.1)取步骤1.3)中得到的产物A体积15～20ml涂布到分离培养基平板上，置于培养箱中进行培养；

所述培养箱的温度范围为30℃；

所述培养时间范围为15天；

2.2)观察步骤2.1)中得到的产物B的菌落生长情况，挑取圆形黄色的单菌落划线到BUG+B鉴定培养基上进行培养；

3)产脲酶细菌的鉴定

3.1)使用接种环挑取步骤2.2)中的单菌落到鉴定培养液GN/GP-IF(革兰氏阴性阳性菌接种液)管壁上，并用接种环将细菌打散，使细菌与鉴定液混合，至比浊计上混浊度在90～95％之间；