[发明专利]一种细胞表面展示有豆壳过氧化物酶的重组酵母菌及其构建方法与应用

摘要

本发明提供了一种细胞表面展示有豆壳过氧化物酶的重组酵母菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明通过设计如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，并将该序列化学合成后连接到pUC57‑simple载体上，然后亚克隆到pMIZY05v2表达载体上，构建重组载体pMIZY05v2‑oEp，经线性化后转化到解脂耶罗威亚酵母PO1h菌株中，得到可表面展示重组豆壳过氧化物酶的工程菌，然后在含有血红素的PPB培养基中培养2～5d，离心收集细胞即得固定化重组豆壳过氧化物酶。利用通过简单离心收集菌体即可得到重组豆壳过氧化物酶，可以省去过氧化酶繁琐的分离纯化步骤，简化生产工艺，降低生产成本。

主权项

1.一种细胞表面展示有豆壳过氧化物酶的重组酵母菌的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：1)化学合成基因序列优化过的豆壳过氧化酶基因oEp，将其连接到克隆载体pUC57-simple中，得到豆壳过氧化物酶基因克隆质粒pUC57S-oEp；所述基因序列优化过的豆壳过氧化酶基因oEp的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示或与SEQ ID NO.1的核苷酸序列具有80％至100％相似性；2)采用限制性内切酶SfiI和BamHI对豆壳过氧化物酶基因克隆质粒pUC57S-oEp进行双酶切，回收豆壳过氧化酶基因片段，并连接到经同样双酶切消化的表面展示载体pMIZY05v2中，得到豆壳过氧化物表面展示质粒pMIZY05v2-oEp；3)采用限制性内切酶NotI对豆壳过氧化酶表面展示质粒pMIZY05v2-oEp进行单酶切消化，电泳分离酶切产物，回收纯化大片段，并将其转化至解脂耶罗威亚酵母宿主细胞中，经发酵培养后，获得细胞表面展示有豆壳过氧化物酶的重组酵母菌。