[发明专利]昆虫细胞表达sST2做为测定血清中sST2浓度的校准品有效
| 申请号： | 201711358221.6 | 申请日： | 2017-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN108106894B | 公开（公告）日： | 2020-09-08 |
| 发明（设计）人： | 王珺楠;李宝民;杜培革;刘斌;关大伟;赵雪;应瑛;隋宝真;王玉华;史永峰;王贺;关恒;安丽萍;苑广信;王曼力;林林;张继海 | 申请（专利权）人： | 吉林大学;长春恒晓生物科技有限责任公司 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N33/68 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 白冬冬 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域。公开了用昆虫细胞表达可溶性生长刺激表达蛋白2做为ELISA测定血清中sST2浓度的校准品过程，此方法步骤如下：提取T47D细胞RNA,用于合成cDNA，用PCR扩增出sST2DNA；用sST2 DNA构成pFastBac‑Flag‑sST2载体，再转导入HD10Bac细菌株，产生重组Flag‑sST2昆虫病毒质粒；把Flag‑sST2AcNPV质粒DNA转导进昆虫细胞，产生重组Flag‑sSt2AcNPV；用Flag‑sST2 AcNPV感染SF9细胞，表达出Flag‑sST2蛋白，用Anti‑Flag M2 affinity agarose纯化出具有自然结构和抗原性Flag‑sST2；用Flag‑sST2作为校准品，建立双夹心酶联免疫法，测定血清或其它液体中sST2浓度,此发明制备出具有蛋白自然结构和抗原性Flag‑sST2，做为测定液体中sST2浓度的校准品，用于临床检测血清中sST2浓度。 | ||
| 搜索关键词： | 昆虫 细胞 表达 sst2 做为 测定 血清 浓度 校准 | ||
【主权项】：
1.一种昆虫细胞表达sST2做为测定血清中sST2浓度的校准品，其特征在于：其步骤是：a、提取T47D RNA，合成T47D cDNA基因库，用PCR扩增出sST2 DNA，核酸序列55-987，构建pFastBac-Flag-sST2载体；b、pFastBac-Flag-sST2载体 DNA 转导到HD10Bac 细菌中，产生重组Flag-sST2AcNPV质粒；c、重组Flag-sST2 AcNPV质粒DNA 转导进到SF9细胞，产生重组Flag-sST2 AcNPV；d、重组Flag-sST2 AcNPV感染SF9细胞并表达出带有8个氨基酸残基-----DYKDDDDK，短肽Flag，sST2-----19-328氨基酸残基的Flag-sST2蛋白；e、用Anti-Flag M2 affinity agarose纯化出具有蛋白自然结构和抗原性Flag-sST2蛋白。
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