[发明专利]一种简便有效的细菌疫苗纯化方法

摘要

本发明在保证肺炎多糖免疫原性和符合欧洲药典各指标要求的前提下，提供了一套快速的、简化的肺炎链球菌发酵液纯化方法，用于制备精制的荚膜多糖。该方法通过改进裂解剂作用环境，控制发酵液的细菌密度、裂解剂浓度、添加裂解剂后的裂解时间，并调节pH到一定范围，可直接经离心、超滤等步骤后用乙醇沉淀多糖，即为精制多糖，取消了微滤、层析等步骤，去掉了CTAB、酶、苯酚等物料的添加，具有多糖收率高、过程简单快速、减少时间成本、人力成本和物料成本等优点。

主权项

一种简便有效的细菌疫苗纯化方法，其特征在于：S1、生产荚膜多糖的细菌发酵液，培养至吸光度保持恒定并开始下降时，终止培养；S2、用组氨酸缓冲液稀释发酵液OD600至6.0以下，加裂解剂至终浓度为0.08~0.15%（w/v），控温14~18℃，持续搅拌24~48小时；S3、将S2步骤处理后的发酵液调pH至2.0~3.0，然后静置沉淀；S4、将S3步骤处理后的发酵液连续流离心，收集上清，再澄清过滤、超滤；S5、加入活性炭、澄清过滤、超滤；S6、用一定浓度的乙醇沉淀S5步骤所得超滤液，得多糖沉淀；S7、离心S6步骤所得沉淀，用无水乙醇和丙酮洗糖、吹干，得精制荚膜多糖，‑20℃保存。