[发明专利]高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法及其应用

摘要

本申请公开了一种高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法及其应用。本申请方法，包括采用定制微孔芯片和ICELL8平台识别单细胞，并在微孔芯片微孔中，对单细胞进行细胞裂解、mRNA逆转录、cDNA预扩增和Tn5转座酶建库，产物可直接用于测序；在mRNA逆转录或Tn5转座酶建库过程中，引入5’端和3’端双端Barcode序列，以获得单细胞全长转录组。本申请方法，单细胞识别通量高，且产物可直接测序。采用本申请方法进行单细胞测序，只需两天时间，即可一次性高效获取数千个单细胞层面全长转录组库，大大降低了人工和时间成本，并且微量反应体系也大大降低了试剂成本，为大规模单细胞全长转录本测序奠定了基础。

主权项

1.一种高通量的单细胞全长转录组测序文库的构建方法，其特征在于：包括对细胞进行染色后，采用定制的微孔芯片和ICELL8平台系统识别单细胞，并且在微孔芯片的微孔中，对识别获得的单细胞依序进行细胞裂解、mRNA逆转录、cDNA预扩增和Tn5转座酶建库，获得可以直接用于后续测序的单细胞转录组测序文库；其中，在mRNA逆转录过程中，添加5’端和3’端的双端Barcode序列，生成5’端和3’端分别具有Barcode序列的cDNA；或者在Tn5转座酶建库的cDNA片段化过程，对核酸片段的5’端和3’端分别添加Barcode序列；又或者在Tn5转座酶建库的片段化后DNA扩增过程时，分别在扩增的上下游引物中设计5’端Barcode序列和3’端Barcode序列；通过5’端和3’端的双端Barcode序列，获得单细胞的全长转录组。